阿勒泰大尾羊FABP4、ADIPOQ和CFD基因分子克隆及其组织差异性表达的研究.pdfVIP

Cloning and differently expression of FABP4, ADIPOQ and CFD genes of Altay sheep A Dissertation Submitted to Shihezi University In Partial Fulfillment of the Requirements for the Degree of Master of Agriculture By Xu rui-xia (Animal Genetics,Breeding and Reproduction) Dissertation Supervisor:Researcher. Shi Guo-qing Researcher.Gan Shang-quan June, 2015 万方数据 万方数据 摘要 目的：阿勒泰羊是一种脂臀型绵羊品种，其独特的尾脂在维持机体正常的新陈代谢和体温过程中扮 演了重要的角色，主要通过尾部脂肪沉积与代谢消长规律来适应恶劣的环境以维持机体正常的新陈 代谢和体温，是研究绵羊尾脂沉积与代谢机制的理想模型。近年来的研究表明， FABP4 、ADIPOQ 和 CFD 基因参与葡萄糖和脂肪酸代谢以及脂肪细胞分化等生理过程，初步推测其与脂肪沉积代谢 密切相关。本文以阿勒泰羊为研究对象，探讨了FABP4 、ADIPOQ 、CFD 基因对阿勒泰羊尾脂沉积 与代谢的影响。 方法： 1、阿勒泰羊饥饿与非饥饿模型的构建。模拟阿勒泰羊在自然生理状态下尾脂沉积与代谢两种极端 状态，即在夏秋季节牧草丰茂时脂肪沉积、春冬季节牧草匮乏时尾脂分解代谢的方式，对阿勒泰羊 进行了饥饿试验，构建了阿勒泰羊饥饿与非饥饿状态下尾脂沉积与代谢的动物模型。 2 、以阿勒泰羊尾脂组织cDNA 为模板，通过RT-PCR 方法克隆获得FABP4 、ADIPOQ 和 CFD 基 因完整的CDS 区序列。 3、以阿勒泰羊心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、肌肉、肠系膜脂肪、尾脂等主要组织 cDNA 为模 板，采用半定量 RT-PCR 方法获得 FABP4 、ADIPOQ 和 CFD 基因在阿勒泰羊不同组织中的表达 谱。 4 、应用实时荧光定量PCR 技术检测了FABP4 、ADIPOQ 和 CFD 基因在阿勒泰羊饥饿与非饥饿模 型尾脂组织中的表达变化情况。 结果： 1、通过2 周逐步限饲和 4 周完全禁食（期间自由饮水）后，饥饿模型阿勒泰羊精神上表现出焦躁 不安、采食欲望强烈；其臀尾表现出―瘪瘦‖表型，臀尾部皮肤松弛、软塌，臀部尾脂体积减小了 1/3 以上；体重显著下降；尾脂脂肪细胞体积变小，呈扁平的梭形。 2 、克隆得到绵羊FABP4 、ADIPOQ 和CFD 基因完整的CDS 序列，分别编码 132、239、261 个氨 基酸。绵羊 FABP4 核苷酸序列及氨基酸序列与山羊、牛、牦牛、马鹿等反刍动物对应序列的同源 性均高达 90% 以上；绵羊ADIPOQ 基因的核苷酸序列与牛、小鼠、大鼠、野猪、人等对应序列的 同源性在75% 以上，其中与牛对应序列的同源性高达85% 以上；绵羊CFD 基因核苷酸序列及其编 码的氨基酸序列与反刍动物牛的同源性均高达96.9% 以上。 3、半定量RT-PCR 检测结果表明，FABP4 基因在阿勒泰羊心脏、肺脏、肌肉、肠系膜脂肪、尾脂 组织