青蒿琥酯纳米脂质体抗肝癌作用及其线粒体途径诱导凋亡机制的研究.pdfVIP

青蒿琥酯纳米脂质体抗肝癌作用及其线粒 体途径诱导凋亡机制的研究 中 文 摘 要 目的：对比研究ART 纳米脂质体与ART 原料药在体外培养肝癌 细胞和人肝癌裸鼠皮下移植瘤模型中的抗肝癌作用，及对凋亡基因表 达的影响。为肝癌的临床治疗探索新的安全有效的药物制剂。 方法：制备ART 纳米脂质体；MTT 法检测其对体外肝癌细胞的 增殖抑制作用；用Hoechst 33258 染色法观察细胞凋亡的形态学改变； 建立人肝癌裸鼠皮下移植瘤模型，观察ART 纳米脂质体的抑瘤作用； 应用 RT-PCR 法检测药物处理后细胞和组织中凋亡因子 Apaf-1、 caspase-9、caspase-3 mRNA 的表达；免疫组织化学法检测凋亡因子 caspase-3 蛋白的表达。 结果：MTT 方法检测 HepG2 细胞的生长抑制情况，结果显示 ART 原料药和ART 纳米脂质体对HepG2 细胞的生长抑制作用呈剂量 和时间依赖性，作用48h 时，ART 原料药组和ART 纳米脂质体组随 药物浓度的不断增加（12.5、25 、50、100、200μg/ml ），细胞生长抑 制率不断增强，当药物浓度为 50µg/ml 时，ART 原料药的抑制率为 85%，ART 纳米脂质体的抑制率为90%，而顺铂在50µg/ml 时的抑制 率为72%，72h 后ART 纳米脂质体组细胞生长抑制率明显强于原料 药组，且差异显著。ART 纳米脂质体的IC50 为 15.997µg/ml ，ART 原料药的IC50 为19.706µg/ml ；对正常肝细胞L-o2 细胞的作用，ART 1 纳米脂质体的 IC50 为 100.226µg/ml ，ART 原料药的 IC50 为 105.54µg/ml ；Hoechst 33258 染色HepG2 细胞发生凋亡形态学改变； 人肝癌裸鼠皮下移植瘤模型，三个处理组瘤重分别为对照组 0.859±0.207g ，ART 原料药组为 0.682±0.240g ，ART 纳米脂质体组 0.578±0.185g。ART 原料药的抑瘤率为20.5% ，ART 纳米脂质体的抑 瘤率为32.7%，ART 脂质体对肿瘤的抑制作用明显高于ART 原料药； RT-PCR 技术检测细胞和组织中凋亡相关因子 mRNA 表达，ART 纳 米脂质体组与原料药组的Apaf- 1、caspas-9、caspas-3 mRNA 表达均 较对照组明显升高，且ART 纳米脂质体组表达量高于原料药组，细 胞和组织中有相同的表达规律；免疫组化法检测 caspas-3 蛋白的表 达，ART 脂质体组高于原料药组高于对照组。 结论：ART 纳米脂质体有较好的抗肝癌作用，对正常肝细胞损 伤较小，通过线粒体途径诱导肿瘤细胞凋亡是其抗肝癌作用机制之 一。 关键词：青蒿琥酯；纳米脂质体；肝癌；凋亡；线粒体 2 Research on the Anti-hepatoma Effect of Artesunate Nano-liposomes and the Mechanisms of Mitochondria Inducing Apoptosis ABSTRACT Objective: Comparing with artesunate API (Active pharmaceutical ingredient), anti-hepatoma effect of artesunate nano-liposomes in liver cancer, the influence of apoptosis related gene expression . Explore new safe