静电纺P3HB4HBHA与鼠BMSCs复合培养的初步研究.pdfVIP

贵阳医学院2012 届硕士研究生论文 静电纺P3HB4HB/HA 与鼠BMSCs 复合培养 的初步研究﹡ 专 业：口腔修复学 研究生：王藜篥 导 师：王 永 教授 摘 要：目的：探讨鼠骨髓间充质干细胞的原代培养方法及定向诱导分化为成骨细 胞的方法，并对所诱导细胞的成骨特性进行检测；研究鼠成骨细胞在静电纺 P3HB4HB/HA 上的附着，增殖及活性。方法：全骨髓贴壁法体外分离培养出鼠骨髓间 充质干细胞并鉴定；贴壁细胞传代，取生长良好的第3代鼠骨髓间充质干细胞将其诱 导分化为成骨细胞，采用碱性磷酸酶染色和茜素红矿化结节细胞学染色的方法对其 鉴定；取鼠成骨细胞接种于P3HB4HB/HA 上，培养到测定时间点后用扫描电镜观察其 在材料上的生长情况并拍片记录；用血球计数板记录材料表面在1d、2d、3d、6d、 7d、8d 的细胞数量，绘制细胞生长曲线；通过用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法 （MTT 比色法）测定不同时间点细胞在材料上的存活、增殖情况。 结果：鼠骨髓间 充质干细胞为均一的梭形的成纤维细胞样细胞，贴壁及增殖能力强，流式检测结果 为CD29阳性、CD90阳性、CD34阴性；鼠骨髓间充质干细胞在成骨诱导剂作用下具有 成骨能力，诱导后成骨活性显著并出现矿化结节；扫描电镜显示成骨细胞能在实验 材料上有一定的附着，MTT 检测结果表明成骨细胞可在材料上增殖并具有活性。结 论：所获得的鼠骨髓间充质干细胞增殖能力强，生长旺盛；由鼠骨髓间充质干细胞 经成骨诱导分化而来的鼠成骨细胞能在静电纺P3HB4HB/HA 上较好的附着和增殖。 关键词： 鼠骨髓间充质干细胞；成骨细胞 ；诱导分化；P3HB4HB/HA ﹡基金项目：贵州省优秀科技教育人才省长专项资金项目 （201083） 贵州省科学技术基金项目 （【2010】2177） 1 贵阳医学院2012 届硕士研究生论文 前 言 种植义齿（implant supported denture ）是通过外科手术将种植体植入牙槽骨内， 以获得固位、支持的一种修复牙体缺失的方法。因其有良好的咀嚼功能，舒适美观， 能够避免或减少天然牙的预备等诸多优点而广泛应用于口腔临床。 近20 多年来，随着外科种植和修复技术的不断完善、种植材料和种植体系的不 [1] 断改进，种植义齿的应用范围逐渐扩大 。但牙槽骨缺损、骨量不足、严重吸收限 制了种植牙的适用症，为适应临床需要，如何增加牙槽骨量已成为近年来的研究热 点。 目前应用的植骨材料有自体骨、同种异体骨、异种骨、生物衍生材料、生物医 学材料、生物陶瓷等及组织工程骨。自体骨仍是骨移植术的首要选择，但因对自身 [2] 骨组织造成损伤，临床应用有限 ；同种异体骨和异种骨有传染疾病的危险，且存 在排斥反应；生物医学材料,如钙磷陶瓷或聚合物/ 陶瓷，虽取材容易但降解速度与骨 [3] 形成速度不一致性影响其与骨缺损区的良好结合 ；组织工程骨因具有无排异反应、 来源广泛、可预先设计成型、生物相容性好等特征已成为骨缺损治疗的热点。 组织工程骨包括种子细胞、支架材料、生长因子三个关键要素。其核心是种子 细胞及支架材料。构建组织工程骨的关键之一是充足的种子细胞，种子细胞的来源 有骨、骨髓、软骨、骨外膜、胚胎骨等。有学者的研究报道称理想的骨种子细胞来 源于骨髓内的骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells ，BMSCs) [4] 。 BMSCs 是一种存在于骨髓中的成体干细胞，是早期发育的中胚层细胞，多向分化潜 能是其主要的特征和鉴定特性，不仅能分化为造血实质,还可在体外培养定向诱导分 化为成纤维细胞、成骨细胞、软骨细胞、肌细胞等。骨髓来源的BMSCs 由于取材容