2008二甲基亚砜作用下重组CHO细胞胞内乙型.pdf

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００８，２８（２）：１６～２０ 二甲基亚砜作用下重组ＣＨＯ细胞胞内乙型 肝炎表面抗原的定位  马浙永　易小萍 　张元兴 （华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室　上海　２００２３７） 摘要　在培养环境中添加二甲基亚砜 （ＤＭＳＯ）能分别提高重组 ＣＨＯ细胞乙型肝炎表面抗原 （ＨＢｓＡｇ）的产量和比生产速率７０％和３．２倍以上，但同时发现胞内ＨＢｓＡｇ的积累量是对照组的 ７．２倍。为了分析胞内ＨＢｓＡｇ积累的区域，采用电镜技术分析后发现，经ＤＭＳＯ处理后的ＣＨＯ细 胞胞内出现了很多的扩张区域，这些扩张区域分布整个胞浆，有的扩张区域已经侵蚀到细胞核 上，而对照组未发现明显的扩张区域。进一步利用免疫电镜技术分析后发现，经ＤＭＳＯ处理后的 细胞胞内大量积累的ＨＢｓＡｇ主要分布在这些扩张区域中，同时发现在细胞核膜上也有分布，这可 能是由于扩张区域侵蚀细胞核造成的。以上工作有助于揭示在ＤＭＳＯ作用下重组ＣＨＯ细胞胞内 ＨＢｓＡｇ大量积累的机制。 关键词　细胞培养　ＣＨＯ细胞　ＨＢｓＡｇ　电镜 中图分类号　Ｑ８１９ 　　乙型肝炎是由乙型肝炎病毒（ＨｅｐａｔｉｔｉｓＢｖｉｒｕｓ， ＤＭＳＯ有效刺激乙肝表面抗原表达的同时，胞内ＨＢｓＡｇ ＨＢＶ）引起的全球性传染病，也是我国当前流行最广 的大量积累制约了产量的进一步提高。因此，在细胞 泛、危害最严重的一种传染病。自从 １９８５年血源性乙 生物学的水平上，探求ＤＭＳＯ存在下，ＨＢｓＡｇ胞内累积 肝疫苗（ＰＤＶ）上市后，对乙肝的控制取得了良好的效 的区域，为进一步揭示胞内ＨＢｓＡｇ积累的机制，并最终 果，在预防人类ＨＢＶ感染方面发挥了很大作用。但是 对解除分泌限制和进一步提高ＨＢｓＡｇ的生产率具有非 由于受血源、质控等限制，血源疫苗难以满足普通接种 常重要的意义。 的需要，而由于重组 ＤＮＡ技术的发展，基因工程乙肝 疫苗在产量、质量、免疫原性和安全性等方面都有较大 １　材料与方法 的优越性，已基本上取代血源疫苗。目前研究和生产 １．１　实验材料 中应用的重组ＨＢｓＡｇ表达系统主要有酵母表达和重组 　　基因工程ＣＨＯ细胞株，为二氢叶酸还原酶缺陷型 ＣＨＯ细胞表达。与酵母表达系统相比，重组ＣＨＯ细胞 的ＣＨＯ细胞株，整合有乙肝病毒的Ｓ基因，编码２２６个 系统表达的ＨＢｓＡｇ更接近天然形式，并且具有更好的 氨基酸残基的Ｓ主蛋白。细胞株由武汉生物制品研究 免疫原性，但是由于ＣＨＯ细胞表达的ＨＢｓＡｇ产量低， 所提供。培养基为 ＤＭＥＭ（ＧＩＢＣＯＢＲＬ），添加 １０％ ［１］ 生产成本很高，不利于推广应用 。因此提高 ＨＢｓＡｇ （ｖ／ｖ）的小牛血清（杭州四季青生物工程材料有限公 在重组ＣＨＯ细胞中的产量具有非常重要的意义。本 司）和１ｍｏｌ／ＬＭＴＸ（ＡＣＲＯＳ）。 μ 实验室前期工作证实了ＤＭＳＯ能显著地提高重组ＣＨＯ １．２　ＤＭＳＯ对ＣＨＯ细胞生产ＨＢｓＡｇ和胞内ＨＢｓＡｇ ［２，３］ 细胞表达 ＨＢｓＡｇ的产量和比生产速率 。然而，在 积累的影响 种子细胞长满单层后，用０．０２５％ （ｗ／ｖ）胰蛋白酶消化 收稿日期：２００