第二章：香菇种质资源的RAPD分析.doc

第二章：香菇种质资源的RAPD分析 1材料与方法 1.1 供试菌株 为本实验室保存菌种。 表2.1 供试菌株 编号 名称 来源 品种特点 1 087 原三明食品所 袋栽种，中温，8~22℃ 2 135 三明真菌所 袋栽种，低温，7~15℃ 3 Cr02 三明真菌所（黄秀治等选育） 袋栽种，杂交选育，中温，8~23℃ 4 L26 三明真菌所 袋栽种，中温，10~25℃ 5 L27 三明真菌所 袋栽种，中温，10~24℃ 6 闽丰一号 三明真菌所(曾金凤等选育) 袋栽种，杂交选育，偏高温，15~25℃ 7 Cr62 三明真菌所（黄秀治等选育） 袋栽种，中温，8~23℃ 8 7401 三明真菌所 段木种，低温，7~20℃ 9 7402 三明真菌所 袋栽、段木种，中温，8~22℃ 10 日大 三明真菌所 段木种，中温，8~23℃ 11 L秋2 三明真菌所 段木种，中温，8~23℃ 12 L11 三明真菌所 段木种，中高温，14~25℃ 13 507 三明真菌所 段木种，中温，8~22℃ 14 L105 三明真菌所 15 L12 三明真菌所 段木种，中温，12~22℃ 16 L18 三明真菌所 段木种8~23℃ 17 236 三明真菌所 段木种，中低温，8~20℃ 18 L03 三明真菌所 段木种，中温，8~22℃ 19 807 三明真菌所 20 241 上海农科院食用菌所 段木种，中低温，7~21℃ 21 申香2号 上海农科院食用菌所 袋栽种 22 申4 上海农科院食用菌所 袋栽种 23 申7 上海农科院食用菌所 袋栽种 24 申8 上海农科院食用菌所 袋栽种 25 申9 上海农科院食用菌所 袋栽种 26 申10 上海农科院食用菌所 袋栽种 27 申12 上海农科院食用菌所 袋栽种 28 申93号 上海农科院食用菌所 袋栽种 29 Cr52 福建省农业区划所（黄秀治等选育） 袋栽种，杂交选育，偏高温，13~27℃ 30 Cr66 福建省农业区划所（黄秀治等选育） 袋栽种，杂交选育，中温，8~23℃ 31 Cr33 福建省农业区划所（黄秀治等选育） 袋栽种，中温，10~23℃ 32 Cr04 三明真菌所（黄秀治等选育） 袋栽种，杂交选育，偏高温，13~26℃ 33 L42 三明真菌所 袋栽种，中温，12~20℃ 34 L66 福建省农业区划所（黄秀治等选育） 35 939 三明真菌所引进 袋栽种，中低温，8~20℃ 36 9015 庆元县食用菌科研中心 袋栽种，筛选，中低温，8~20℃ 37 241-4 庆元县食用菌科研中心 袋栽种，筛选，中低温，7~20℃ 38 庆科20 庆元县食用菌科研中心 袋栽种，筛选，中温，8~23℃ 39 武香 武义市真菌所 袋栽种，筛选，偏高温8~25℃ 40 苏香 福建省农业区划所（蔡衍山引进） 袋栽种，筛选，中温，8~23℃ 以上40个为我国主要的香菇栽培菌株。 1.2 培养基 1.2.1试管斜面培养基 PDA培养基200g马铃薯、20g葡萄糖、20g琼脂、1000mL水。 1.2.2液体PDA培养基 PDA培养基200g马铃薯、20g葡萄糖、1000mL水。 1.3 试剂仪器 10bp随机引物为Sangon产品;MgCl2和脱氧核苷三磷酸(dNTP，2.5mM each)、Taq DNA聚合酶(5U/μl)为TaKaRa产品。 紫外可见分光光度计：Pharmacia Biotech ultrospec?2000 电泳仪：D-YY-12型电脑三恒多用电泳仪（北京六一仪器厂） 凝胶成像系统：TANON-2008 冷冻离心机:Sigma 3K30 PCR扩增仪:Eppendorf AG22331 Hamburg 冷冻离心机:Sigma 3K30 掌型离心机：江苏海门市麒麟医用仪器厂Lx-100手掌型离心机 1.4 菌丝培养 将40个香菇冰箱保种菌种接于试管斜面培养基，转管活化7－10天，用接种耙耙碎后，接入250ml三角瓶液体培养基中，每个菌株各接3瓶，于25℃摇床上120 rpm培养10天，用400目铜网过滤，蒸馏水冲洗，滤纸吸干，保存于－20℃备用。 1.5 DNA提取方法 1.5.1氯化苄法:将菌丝体置于无菌研钵中，倒入液氮，迅速研磨至粉末状。在50 ml离心管中加入１ｇ菌丝体和５ml提取液，振荡使之充分混合，再加入20％ ＳＤＳ １ml、，氯化苄３ml，剧烈振荡使管内混合物成乳状。在50℃保温1h，每隔10min振荡混合一次。随后加入３ml 3 mol/L NaAc (pH5.2)混匀，冰浴15min，6000 r/min离心15min,收集上清液。加入2倍体积无水乙醇于室温下沉淀20 min。10000