免疫组化—ABC试剂盒法.docVIP

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2017-06-10 发布于北京
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免疫组化—ABC试剂盒法.doc

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免疫组化ABC试剂盒(VECTOR)操作流程工作液准备封闭血清（黄色小瓶子）：3滴原液+10mL的缓冲液混合，装入黄色的大瓶子；生物素二抗（蓝色小瓶子）：1滴原液+10mL的缓冲液混合，装入蓝色的大瓶子； ABC复合物：2滴A液加入10mL的缓冲液混合后，加入2滴B液混匀后装入标有ABC的大瓶子。此处反应需要30min。1滴大概50uL 试剂（自备）二甲苯、PBS缓冲液柠檬酸盐缓冲液0ul DAB stock solution 、50ul Hydrogen Peroxide solution充分混匀步骤 1.脱蜡和水化 60min或60℃恒温箱中烘烤20min。 1）组织切片置于二甲苯中浸泡10min，更换二甲苯后再浸泡10min； ?2）无水乙醇中浸泡5min； ?3）95%乙醇中浸泡5min； ?4）70%乙醇中浸泡5min； ?2.PBS洗两次各5min。 ?3.抗原修复用于福尔马林固定的石蜡包埋组织切片。煮沸热修复电炉或者水浴锅加热0.01M枸橼酸钠缓冲溶液（pH6.0）至95℃左右，放入组织切片加热10~15min ?4.PBS洗5min。用蒸馏水或PBS配置新鲜的%H2O2，室温封闭5～10min，洗3次。6.滴加，室温封闭0min，以减少非特异背景，无需冲洗只需吸去多余。7.滴加抗室温1小时或者4℃过夜或者37℃1小时（4℃过夜后在37℃复温45min）。 ?8.PBS洗次每次2min。9.滴加生物素二抗工作液，室温度孵育30min。 ? ?10.PBS洗3次每次2min。 30min。 12.PBS洗次每次2min? ?13.DAB显色：DAB显色试剂盒或者自配显色剂显色（镜下掌握显色程度）。 ?14.蒸馏水洗苏木素复染。15.脱水：把切片放入50%、70%、80%、90%、95%、100%乙醇中脱水，每次2min。