抗重金属汞离子抗体的制备及鉴定.PDF

生 物 工 程 学 报 Chin J Biotech 2010, June 25; 26(6): 753−759 journals.im.ac.cn Chinese Journal of Biotechnology ISSN 1000-3061 cjb@im.ac.cn ©2010 CJB, All rights reserved. 动物及兽医生物技术 抗重金属汞离子抗体的制备及鉴定 1,2 1 2 2 2 2,3 赵丽 ，王凤龙 ，杨慧 ，李鹏 ，刘满杏 ，李霞 1 内蒙古农业大学动物科学与医学学院，呼和浩特 010018 2 北京市农林科学院蔬菜研究中心，北京 100097 3 北京农产品质量检测与农田环境监测技术研究中心，北京 100097 摘 要: 汞、镉、铅等重金属引起的环境污染已在世界范围内造成危害。快速、廉价地监测生境中重金属是减小其对 人类及动物危害的先决条件。传统检测方法无法满足高通量的现场检测，建立更快速、更经济的免疫分析法检测汞离 子是生产及经济发展的需要。本研究中，报道了汞特异性单克隆抗体的制备与筛选方法和结果。因 Hg2+ 太小以至于不 能引起免疫反应，所以用螯合剂 (二乙烯三胺五乙酸，DTPA) 将金属离子与载体蛋白 (匙孔血蓝蛋白，KLH) 连接起 来。成功合成、鉴定汞复合物抗原后，免疫 BALB/c 小鼠，通过细胞融合获得了稳定分泌抗体的杂交瘤细胞。用极限 稀释法亚克隆，通过 ELISA 筛选，获得了2 株稳定分泌抗汞离子抗体的细胞株 (H2H5 ，H1H8) 。小鼠腹腔注射 1×107 H2H5 、H1H8 细胞株制备腹水，腹水抗体效价都在1 ∶51 200 以上。经鉴定两株杂交瘤均为IgG1 亚类，轻链为kappa 型且分泌抗体稳定性较好。实验结果为汞离子残留免疫学检测方法的建立提供了技术基础，对提高风险评估工作的效 率和质量，保障食品安全有重要现实意义。 关键词: 汞，螯合抗原，单克隆抗体，酶联免疫吸附法 Preparation and characterization of specific monoclonal antibodies against mercury ions 1,2 1 2 2 2 2,3 Li Zhao , Fenglong Wang , Hui Yang , Peng Li , Manxing Liu , and Xia Li 1 College of Animal Science and Medicine, Inner Mongolia Agricultural University, Hohhot 010018, China 2 Vegetable Research Center of Beijing Academy of Agriculture and Forestry Sciences, Beijing 100097, China 3 Beijing Research Center for Agri-food Testing and Farmland Monitoring, Beijing 100097, China Abstract: The environmental pollution by heavy metals such as mercury, cadmium and lead has become a worldwide public health hazard. To rapidly