第十章 紫外 可见分光光度法.ppt

* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 单光束分光光度计 双光束分光光度计 波长范围 波长准确度 波长重现性 吸光度(透光率)测量范围 光度准确度 光度重复性 分辨率 杂散光 2、分光光度计的光学性能 3、分光光度计的校正 (1) 波长校正 (2) 吸光度校正 (3) 吸收池校正 紫外可见分光光度计的发展趋势 小型化 智能化 在线化 网络化 美国海洋光学的光纤光谱仪(USB-4000型) 什么是比色法？ 对于能吸收可见光的有色溶液的测定方法。 许多不吸收可见光的无色物质可以用显色反应变成有色物质，使之能用比色法测定。 也称为可见分光光度法。 显色反应的条件 1、被测物质与所生成的有色物质之间，必须有确定的定量关系。 2、反应产物必须有足够的稳定性。 3、显色剂在测定波长处无明显吸收。 4、反应产物的摩尔吸收系数足够大(103～105)，以保证灵敏度。 5、显色反应须有较好的选择性，才能减免干扰因素。 影响因素 1.试剂与溶剂 2.酸碱度 3.时间 4.温度及其它 为使反应能进行完全，常需有过量的显色试剂，但试剂的用量，可影响产物的组成。 溶剂的性质可影响物质对光的吸收，使之呈现不同的颜色。 1.试剂与溶剂 2.酸碱度 许多有色物质的颜色，随溶液中的氢离子浓度而改变，同时显色反应的历程也多与溶液的酸碱度有关。有些反应甚至须用缓冲溶液来保持溶液的pH值。 3.时间 由于反应速度不同，完成反应所需时间常有较大差异。有色产物也会在放置过程中发生变化。对于一个显色反应中各个步骤所需时间和颜色能稳定地保持多久，常须通过实验确定。 * * * * * * * * * * * * * * * * * * 散射光和反射光 吸光质点对入射光有散射作用，入射光在吸收池内外界面之间通过时又有反射作用。散射光和反射光，都是入射光谱带宽度内的光，对透射光强度有直接影响。 是空白对比补偿的原因。 非平行光 通过吸收池的光，一般都不是真正的平行光，倾斜光通过吸收池的实际光程将比垂直照射的平行光的光程长。 这种测量时实际厚度的变异也是同一物质用不同仪器测定吸光系数时，产生差异的主要原因之一。 (三) 透光率测量误差 1、暗噪音(dark noise) 暗噪音是光电检测器或热检测器与放大电路等各部件的不确定性引起的，与光讯号无关，可视为一个常量。其在A为0.2～0.7范围内，造成相对误差较小，为测量最适宜范围。(图10-11) 有一化合物在醇溶液中的?max为240nm, 其?为1.7?104 ，分子量为314.47。试问配制什么样浓度(g/100ml)测定含量最为合适。 (3.70×10-4～1.29×10-3) 2、讯号噪音 讯号噪音亦称讯号散粒噪音。光敏元件受光照射时的电子迁移，每一单位时间中电子迁移数量是不相等的，而是在某一均值周围的随机数，形成测量光强时的不确定性。随机数变动的幅度随光照增强而增大，与光的波长及光敏元件的品质有关。 How UV-Vis is applied in quantitative analysis? How UV-Vis is applied in qualitative analysis? UV Spectrophotometer 一、定性鉴别 （一）对比吸收光谱特征数据 1.吸收峰 2.谷 3.肩峰 4.末端吸收 (二) 对比吸光度(吸光系数)的比值 举例：UV-Vis法鉴别VB12注射液 361nm 550nm 278nm 【鉴别】 取含量测定项下的溶液、照紫外可见光光度法（附录Ⅳ A）测定，在351nm与550nm的波长处有最大吸收361nm波长处的吸光度与550nm波长处的吸光度的比值应为3.15～3.45。 (三) 对比吸收光谱的一致性 将试样与已知标准品配制成相同浓度的溶液，在同一条件下分别描绘吸收光谱，核对其一致性。两个化合物若是相同的，其吸收光谱应完全一致。也可利用文献所载的标准图谱进行核对。 定性原则： 对比结果相同，可能是同一物质。 对比结果不同，肯定不是同一物质。 丙酸倍氯米松-倍他米松紫外光谱图 丙酸倍氯米松的 1条吸收光谱 倍他米松的 1条吸收光谱 比对比较 褶合 变换 褶合变换 135条褶合光谱 135条褶合光谱 丙酸倍氯米松-倍他米松褶合光谱差谱图 (