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观察过的正常骨髓细胞系统:红细胞系统、粒细胞系统、巨核细胞系统、单核/淋巴/浆细胞系统,以及一些少见细胞
观察过的非正常骨髓涂片:巨幼细胞贫血(MgA)、增生性贫血(包括缺铁性贫血IDA)、再生障碍性贫血(AA);急性/慢性髓系白血病(AML/CML)、急性/慢性淋巴细胞白血病(ALL/CLL);骨髓增生异常综合征(MDS)、多发性骨髓瘤(MM)、特发性血小板减少性紫癜(ITP)。
以上内容结合理论课一并复习,注重其血象和骨髓象(尤其是特征性细胞),不特别整理。
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细胞化学染色:是以细胞形态学为基础,根据化学反应的原理,应用骨髓涂片进行固定、化学反应显色、复染等程序染色,然后在光学显微镜下观察细胞的化学成分及其变化的一项检验方法。
【作用】
研究血细胞在生理或病理情况下细胞化学成分的变化,有助于了解各种血细胞的化学组成及病理生理改变,可用作血细胞类型的鉴别,以及对某些血液病的诊断和鉴别诊断、疗效观察、发病机制探讨等均有一定价值。
一、过氧化物酶(POX)染色
【原理】
POX能分解试剂中的底物H2O2,释放新生态氧,使无色联苯胺氧化为蓝色联苯胺,后者与亚硝基铁氰化钠结合形成蓝黑色的颗粒,沉着于细胞质中。
二氨基联苯胺法的原理为:血细胞内的POX,能分解H2O2而释放出新生氧,后者氧化二氨基联苯胺,形成金黄色不溶性沉淀,定位于POX酶所在的活性部位。
正常血细胞的染色反应
粒细胞系统:分化差的原始粒细胞为阴性,分化好的原始粒细胞至中性成熟粒细胞均呈阳性;且随着细胞的成熟,阳性反应的程度逐渐增强。嗜酸性粒细胞阳性最强,嗜碱性粒细胞阴性。
单核细胞系统:大多数细胞呈阴性或弱阳性,阳性颗粒少而细小。
其他细胞:淋巴细胞系统、红细胞系统及巨核细胞系统的细胞均呈阴性,浆细胞、组织细胞也呈阴性,吞噬细胞有时呈阳性。
【临床意义】
主要用于急性白血病类型的鉴别:急性粒细胞白血病时,白血病细胞多呈强阳性反应;急性单核细胞白血病时, 呈弱阳性或阴性反应;急性淋巴细胞白血病呈阴性反应。
二、中性粒细胞碱性磷酸酶(NAP)染色
【原理】
(偶氮偶联法)血细胞中的碱性磷酸酶在pH为9.4~9.6的条件下将基质中的α磷酸萘酚钠水解,产生α—萘酚与重氮盐偶联形成棕黑色沉淀,定位于细胞质内酶活性所在之处。
(钙钴法):碱性磷酸酶在碱性条件下将基质液中β甘油磷酸钠水解,产生磷酸钠。再依次与硝酸钙、硝酸钴、硫化胺发生一系列反应,形成不溶性棕黑色的硫化钴,定位于酶活性之处。?
正常血细胞的染色反应 NAP主要存在于中性成熟粒细胞胞浆内,故中性成熟粒细胞胞浆呈阳性,其他细胞基本呈阴性。在油镜下计数100个成熟中性粒细胞,分别记录其分级情况:(-)、(+)、(++)、(+++)、(++++),分别为1、2、3、4分, 100个细胞中阳性细胞总数即为阳性率,100个细胞中阳性细胞的积分之和即为积分值。
【参考范围】 ?
阳性率﹤40%,NAP的积分值为30~130分。
【临床意义】
感染性疾病:作细菌性感染与病毒性感染的鉴别。
慢性粒细胞白血病的NAP严重减低,类白血病反应的NAP极度增高。
急性粒细胞白血病时NAP积分减低,急性淋巴细胞白血病的NAP积分多增高,急性单核细胞白血病时一般正常或减低。
再障时NAP活性增高,PNH时活性减低可鉴别。
其他血液病:恶组减低。
腺垂体或肾上腺皮质功能亢进等NAP积分可增高。
三、糖原染色(PAS),即过碘酸-雪夫反应
【原理】
过碘酸能将血细胞内的糖原氧化,生成醛基,醛基与Schiff液中的无色品红结合,形成紫红色化合物,定位于细胞质中。
正常血细胞的染色反应:
粒细胞系统:分化差的原始粒细胞阴性,分化好的原始粒细胞至中性分叶核粒细胞均呈阳性反应,并随着细胞的成熟而逐渐增强,阳性呈弥散性、细颗粒状;嗜酸性粒细胞中的嗜酸性颗粒本身不着色,而颗粒之间的胞质呈红色;嗜碱性粒细胞中的嗜碱性颗粒呈阳性,而颗粒之间的胞质不着色。
红细胞系统:有核红细胞及红细胞均呈阴性。
单核细胞系统:分化差的原始单核细胞呈阴性,其他阳性,绝大多数阳性呈细颗粒状,有时分布于细胞边缘的阳性颗粒较粗大。
【临床意义】
幼红细胞出现PAS强阳性反应可见于红血病和红白血病,有助于与其他红细胞系统疾病的鉴别。也可见于部分严重缺铁性贫血,重型地中海及巨幼细胞贫血。
急性粒细胞白血病细胞PAS反应阴性或弱阳性反应,常呈细颗粒状或均匀淡红色;急性单核细胞白血病细胞PAS反应呈弥漫性阳性而胞质边缘或伪足处阳性颗粒稍粗;急性淋巴细胞白血病的PAS反应呈粗颗粒,甚至大块状。
其他:可识别不典型巨核细胞、区分高雪细胞(阳性)与尼曼—皮克细胞、鉴别腺癌细胞等。
四、铁染色
【原理】
细胞中的铁在酸性条件下与低铁氰化钾溶液反应,生成蓝色的铁氰化钾(普鲁士蓝),定位与含铁的部位。
【
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