病毒感染的实验诊断.ppt

病毒血清学试验常用方法 （一）中和试验 原理 抗体与相应病毒结合后，能够使病毒失去感染性。 V.＋Ab → 失去感染易感细胞的能力 一定量抗体可中和一定量病毒 根据抗体的效价对待测病毒液进行半定量检测。 中和试验的必要条件： 1. 活病毒 2. 敏感细胞、鸡胚或动物 * 中和试验的特点： 特异、敏感，既可检测抗体，也可测定抗原（定属、定型）。 既可用细胞培养做，也可用动物或鸡胚接种，以细胞培养法最常用。 检测IgG，不能用于早期诊断，常用于流行病学调查。 * （二）补体结合试验 检测IgM，常用于早期诊断。 不需活细胞，比中和试验简单，省时。 （三）IF及ELISA 方法简单、快速、敏感性高。 检测特异性IgM，有助于某些病毒感染的早期诊断，如： 孕妇羊水中检测IgM型特异抗体：胎儿先天性感染 抗HBc IgM：作为急性HBV感染的指标 * （四）血凝及血凝抑制试验 含有血凝素的病毒能吸附一定种类的哺乳动物或禽类的红细胞，使红细胞凝集。该现象可被相应的血凝素抗体抑制，称为血凝抑制试验，可用于病毒的分型。 * 五、病毒抗原检查 DFA、IFA、IEA等。 可检测细胞内、外的游离病毒抗原。 敏感、特异，简便、快速。适用于多种病毒性疾病的早期快速诊断。 Influenzavirus A培养物DFA染色阳性 生殖道HSV-2涂片DFA染色阳性 * 六、病毒的分子生物学检测 分子生物学方法可检测以不同形式存在的病毒基因片断。 方法敏感、特异、简便、快速。 核酸电泳技术 核酸杂交技术 PCR 基因芯片技术 * * 病毒感染的实验诊断 王 跃临床微免教研室 什么是病毒？ 病毒（virus）是一类体积微小、结构简单、有严格的细胞内寄生性的非细胞型微生物。 * 特点： 体积微小，只能在电镜下观察，能通过滤菌器 无完整的细胞结构：蛋白质衣壳＋核酸核心 只有一种类型核酸：RNA或DNA 有严格的细胞内寄生性，只能在活细胞内生长 以核酸复制的方式增殖，不能进行二分裂繁殖 抵抗力特殊：耐冷不耐热，对化学因素的抵抗力较一般比细菌强，耐甘油，对抗生素及磺胺类药物不敏感，干扰素可抑制病毒复制。 * 病毒感染的实验诊断方法 病原学诊断 病毒分离培养 显微镜检查 抗原检测 核酸检测 血清学诊断 抗体检测 IgM、IgG * 一、标本采集、运送和处理 （一）标本采集 采集时间：尽早采集（越早越好） 标本种类：根据感染的部位、可能感染的病毒类型选择标本种类 无菌采集标本：必要时用抗生素或抗真菌药处理 抑制细菌生长 100U/ml青霉素＋100μg/ml链霉素 抑制真菌生长 2.5μg/ml二性霉素B 或40 μg/ml制霉菌素 血清学检查标本：双份血清 * （二）标本的运送与保存 1.低温送检 4℃可保存数小时，-70℃可长期保存 -10 ～ -20℃下病毒易灭活，不可用于保存病毒标本 对冷冻标本应避免反复冻融 2.保湿送检 50%甘油盐水保存送检 病毒转运培养基（virus transport medium ，VTM）含0.5%明胶或牛血清白蛋白的Hank’s液 3.无菌送检 抑制细菌生长 100U/ml青霉素＋100μg/ml链霉素 抑制真菌生长 2.5μg/ml二性霉素B 或40 μg/ml制霉菌素 * 二、病毒的形态学检查 1. 光学显微镜检查 主要观察病变组织中的包涵体，某些大病毒也通过光学显微镜观察。 简便、快速，但敏感性低，有些病毒感染细胞后不形成包涵体 狂犬病毒胞浆内包涵体 （内基小体） 巨细胞病毒胞核内包涵体 （猫头鹰眼） * 2. 电镜及免疫电镜检查 直接检查标本中的病毒颗粒，快速，可确诊。但敏感性低（＞106/ml） 免疫电镜敏感性高，但只能用于已知病毒的检测） 乙型肝炎病毒电镜图 轮状病毒电镜图 * 三、病毒的分离与鉴定 动物接种 组织培养 标本采集 标本处理后接种 鸡胚接种 卵黄囊膜 尿囊液 羊膜腔液 绒毛尿囊膜 观察囊膜病变 血凝试验 血凝抑制试验 CPE EM 包涵体 空斑试验 红细胞吸附 中和试验 观察发病 抗原检测 抗体检测 病理检查 * （一）病毒的分离 组织培养 鸡胚培养 动物接种 * 1. 组织培养 将人或动物离体的活组织或分散的活细胞在体外人工控制的条件下使其生长繁殖的一种技术。 组织培养的类型: （1）组织块培养 （2）器官培养 人胚气管－呼吸道病毒； 人胚肠－ 肠道病毒 （3）细胞培养 最常用 原代和次代细胞培养 二倍体细胞培养 传代细胞培养 * 动物新鲜组织（人胚肾等）→胰酶消化→营养液培养→单层细胞（原代细胞） 原代细胞→胰酶消化→转种培养（次代培养细胞） 对