北京棒杆菌的培养条件.doc

北京棒杆菌的培养条件 北京棒杆菌 淀粉的0.5一0. 8 ,ph1. 5左右,使淀粉乳越过糊化的温度，玉米淀粉 糊化过程温度为55 ~ 62. 5 0C;采用0. 15 M Pa糖化110 m ino采用碘量法}3]对水解淀粉中葡萄糖含量进 行测定。 1.2.2菌种扩培 采用无菌操作，菌种为北京棒杆菌AS1. 299,培养温度为320C。一级种了的培养基质量用量配方为葡萄糖0. 1%、蛋白陈1.0 %,氯化钠0. 5% ,琼脂2. 0%~2.5%,ph7.0~7.2二级种了的配方为葡糖2.5%,尿素0.5%、硫酸镁0. 04% ,磷酸一氢钾0. 1%、玉米浆2.5%~3.5% (按质增减)、硫酸亚铁、 流酸锰各2x10 -6g/Lph7.0三级种了的配方为葡萄糖2.5%、玉米浆2.5 %,磷酸一氢钾0. 1% ,硫酸镁0. 04%、尿素0.5%、硫酸亚铁、硫酸锰各2 x 10-6 g/L pH 6. 5一6.8 发酵培养基采用葡萄糖浓度125一150g /L,磷酸2氢钾1一1. 5 g/L,硫酸镁0.25~1.0g/L,硫酸亚铁、硫酸锰各2x10-6g/L.,玉米浆0.4%~0.8% 常用25种培养基 一、牛肉膏蛋白胨培养基(培养细菌用) 　　牛肉膏 3g 　　蛋白胨 10g 　　NaCl 5g 　　琼脂 15—20g 　　水 1000ml 　　pH 7．0—7．2 　　1．05kg/cm2　，121．3℃灭菌20分钟。 　　二、淀粉琼脂培养基(高氏1号培养基，培养放线菌用) 　　可溶性淀粉 20g 　　KNO3　 1g 　　NaCl 0．5g 　　K2　HPO4　 0．5g 　　MgSO4　 0．5g 　　FeSO4　 0．01g 　　琼脂 20g 　　水 1000ml 　　pH 7．2—7．4 　　配制时，先用少量冷水，将淀粉调成糊状，在火上加热，边搅拌边加水及其他成分，溶化后，补足水分至1000ml。1．05kg/cm2　，121．3℃灭菌20分钟。 　　三、查氏培养基(培养霉菌用，实验16) 　　NaNO3　 2g 　　K2　HPO4　 1g 　　KCl 0．5g 　　MgSO4　 0．5g 　　FeSO4　 0．01g 　　蔗糖 30g 　　琼脂 15—20g 　　水 1000ml 　　pH 自然 　　1．05kg/cm2　，121．3℃灭菌20分钟。 　　四、马丁氏(Martin)琼脂培养基(分离真菌用) 　　葡萄糖 10g 　　蛋白胨 5g 　　KH2　PO4　 1g 　　MgSO4　·7H2　O 0．5g 　　1/3000孟加拉红(rose bengal，玫瑰红水溶液) 　　100ml 　　琼脂 15—20g 　　pH 自然 　　蒸馏水 800ml 　　0．56kg/cm2　(8磅/英寸2　)，112．6℃灭菌30分钟。 　　临用前加入0．03%链霉素稀释液100ml，使每毫升培养基中含链霉素30μg。 　　五、马铃薯培养基 (实验16) 　　马铃薯 200g 　　蔗糖(或葡萄糖) 20g 　　琼脂 15—20g 　　水 1000ml 　　pH 自然 　　马铃薯去皮，切成块煮沸半小时，然后用纱布过滤，再加糖及琼脂，溶化后补足水至1000ml。1．05kg/cm2　，121．3℃灭菌20分钟。 　　六、麦芽汁琼脂培养基 (实验15) 　　1．取大麦或小麦若干，用水洗净，浸水6—12小时，置15℃阴暗处发芽，上盖纱布一块，每日早、中、晚淋水一次，麦根伸长至麦粒的两倍时，即停止发芽，摊开晒干或烘干，贮存备用。 　　2．将干麦芽磨碎，一份麦芽加四份水，在65℃水浴锅中糖化3—4小时，糖化程度可用碘滴定之。 　　3．将糖化液用4—6层纱布过滤，滤液如混浊不清，可用鸡蛋白澄清，方法是将一个鸡蛋白加水约20ml，调匀至生泡沫时为止，然后倒在糖化液中搅拌煮沸后再过滤。 　　4．将滤液稀释到5—6波美度，pH约6．4，加入2%琼脂即成。 　　1．05kg/cm2　，121．3℃灭菌20分钟。 　　七、葡萄糖-醋酸盐培养基 (实验15) 　　葡萄糖 1g 　　酵母浸膏 2．5g 　　醋酸钠 8．2g 　　琼脂 15g 　　蒸馏水 1000ml 　　pH 4．8 　　分装试管，0．70kg/cm2　(10磅/英寸2　)，115．2℃灭菌20分钟后制成斜面。 　　八、半固体肉膏蛋白胨培养基 (实验26) 　　肉膏蛋白胨液体培养基 100ml 　　琼脂 0．35—0．4g 　　pH 7．6 　　1．05kg/cm2　，121．3℃灭菌20分钟。 　　九、合成培养基 (实验36，39) 　　(NH4　)2　PO4　 1g 　　KCl 0．2g 　　MgSO4　·7H2　O 0．2g 　　豆芽汁 10ml 　　琼脂 20g 　　蒸馏