Pierce交联磁珠式免疫沉淀免疫共沉淀试剂盒.PDF

说明书 Pierce™交联磁珠式免疫沉淀/免疫共沉淀试剂盒 88805 2309.4 货号 描述 88805 Pierce 交联磁珠式免疫沉淀/免疫共沉淀试剂盒，包含足够完成40 个反应的试剂，每个反应使用 25 µL 磁珠 试剂盒组成: Pierce 蛋白A/G 磁珠 1 mL，贮存于含有0.05% NaN3 的水中，浓度为10 mg/mL Pierce 免疫沉淀裂解/漂洗缓冲液，2 ×50 mL，pH 7.4，0.025M Tris，0.15M NaCl ，0.001M EDTA， 1% NP40 ，5% 甘油 20 ×交联缓冲液，25 mL, 稀释后含10 mM 磷酸钠，150 mM NaCl；pH 7.2 DSS （辛二酸二琥珀酰亚胺酯），No-Weigh™形式，8 ×2 mg 微型管 中和液，1.0 mL，pH 8.5 洗脱液，25 mL，pH 2.0 电泳上样缓冲液，非还原性， （5 ×）, 5 mL，pH 6.8，0.3M Tris·HCl ，5% SDS，50% 甘油，泳道标记示踪染料 贮存条件：收到本产品后于4°C 贮存。冰盒运输。 目录 产品简介 2 流程简述 2 重要产品信息 2 所需额外试剂和仪器 3 Pierce 经典磁珠式免疫沉淀试剂盒流程 3 A. 将抗体结合于蛋白A/G 磁珠上 3 B. 交联结合的抗体 4 C ．哺乳动物细胞裂解 4 D. 手动抗原免疫沉淀 5 E. 自动免疫沉淀 5 问题解决 7 网站附加信息 7 Thermo Scientific KingFisher 仪器的常见问题 8 Thermo Scientific 相关产品 8 1 产品简介 Thermo Scientific™ Pierce™ 交联磁珠式免疫沉淀/免疫共沉淀试剂盒通过共价键将抗体交联于Thermo Scientific™ Pierce™ 蛋白A/G 磁珠上能够高效完成抗原免疫沉淀 （IP ）及免疫共沉淀 （Co-IP ）实验。本试剂 盒首先将抗体结合到磁珠上，再通过使用化学交联剂辛二酸二琥珀酰亚胺酯（DSS ）共价交联在磁珠上。抗 体交联了的磁珠，再通过漂洗去除未共价结合的抗体。将已准备好的磁珠与抗原样品孵育，通过漂洗去除未 结合物质，并用低pH 的洗脱液将结合的抗原从抗体交联的磁珠上分离下来。本试剂盒包含了优化的缓冲液， 免疫沉淀可使用最少2 µg 抗体、免疫共沉淀可使用最少5- 10 µg 抗体，即可获得大量抗原。同时还含有为 SDS分析准备的样品缓冲液。抗体结合和交联通过借助磁力架的手动方式实现，而免疫沉淀和免疫共 沉淀均可通过手动或自动方式完成，自动方式使用如Thermo Scientific KingFisher Flex 系统的仪器实现。 流程简述 1. 用1×改良交联缓冲液预洗磁珠两次。 2. 将抗体与磁珠结合 15 分钟。 3. 用1×改良交联缓冲液洗磁珠三次。 4. 用DSS 进行抗体与磁珠的交联30 分钟。 5. 用洗脱液漂洗磁珠三次，之后用免疫沉淀裂解/漂洗缓冲液洗磁珠两次。 6. 将细胞裂解液与抗体交联的磁珠在室温下孵育 1-2 小时，或4 ºC 过夜。 7. 用免疫沉淀裂解/漂洗缓冲液洗磁珠两次，之后用纯水洗一次。 8. 洗脱结合的抗原。 重要产品信息 • 抗体的偶联与交联步骤通过磁力架手动实现。免疫沉淀可以手动完成，亦可使用自动化仪器平台如