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维普资讯 福建农林大 学学报 (自然科学版 ) 第 32卷 第 1期 JournalofFujianAgricultureandForestryUniversity (NaturalScienceEdition) 2003年 3月 余甘子基因组DNA提取及 RAPD反应条件优化 蔡英卿 ，赖钟雄H ，桑庆亮 ，郭志雄 ，郭玉琼 ，潘东 明。 (1．福建农林大学亚热带果树研 究所 ，福建 福州 350002；2．泉州师范学院生物 系，福建 泉州 362000) 摘要 ：以余甘子叶片为材料 ．研 究了余甘子基 因组 DNA 提取方法及 RAPD反应条件 ．结果表 明，采用改 良的SDS方法 ．提 取 的 DNA 质 量较 高 ，适宜 于 RAPD—PCR分 析．在 25f』L反 应 体积 中．RAPD 分 析 的优 化 反 应 体 系 为 ：0．6mmol·L Mg”、500—600gmol·L_。dNTP、300nmol·L 随机引物、25ngDNA、1．OO一1．25U TaqDNA聚合酶． 关键词 ：余甘子 ；DNA 提取 ；RAPD；优化 中图分类号 ：$667．9，Q78 文献标识码 ：A 文章编号 ：1006—7817(2003)01—0089—04 Genom icDNA extraction andoptimization ofRAPD analyticconditionsof PhyllanthusemblicaL． CAIYing—qing’，LAIZhong—Xiong ，SANG Qing—liang’，GUO Zhi—xiong，GUO Yu—qiong ， PAN Dong—m ing (1．InstituteofSubtropicalFruits．FujianAgricultureandForestryUniversity，Fuzhou，Fujian350002．China；2．Department ofBiology．QuanzhouTeachersCollege，Quanzhou，Fujian362000，China) Abstract：Themethodofgenom icDNA extractionandtheoptimizationofRAPD analyticconditionswerestudiedinPhyllan— thusemblicaL．TheresultsshowedthathighgradegenomicDNA wasobtainedbytherevisedSDSmethod ．TheoptimalPCR system forRAPD analysiswasasfollows：0．6mmol ·L一 Mg ．500— 600pmol-L-。dNTP，300nmol ·L一 random primer，25ngDNA template．1．OO一 1．25U Taqpolymerasein25 “L reaction solution． Keywords：PhyllanthusemblicaL．；DNA extraction；RAPD；optim ization 余甘子 (PhyllanthusemblicaL．)是大戟科叶下珠属 (油柑属)的一种落叶灌木或小乔木 ，其果实具有 抗衰老、抗癌等药用功效 ，是药食兼用的保健果品．目前余甘子 已成为我国沿海地区丘 陵综合开发的重要 经济树种之一L1]，被联合 国卫生组织指定为在全世界范围内推广种植的 3种保健植物之一[2]．我国余甘子 种质资源非常丰富，但 品种分类很混乱 ，建立余甘子种质资源与品种鉴别 的方法十分迫切．RAPD—PCR技 术L3]是 由Williamsetal于 1990年创立的一种 DNA 分子标记技术 ，因其具有操作简单快捷 ，灵敏度高，通 用性好，且无需预先了解物种基因组 的相关分子生物学信息等优点而广泛应用于种质资源分析[4--6]．鉴于 此，我们拟采用 RAPD技术进行余甘子种质资源的研究．本文首先报道余甘子基因组 DNA 提取方法及其 RAPD—PCR分析的最佳反应体系 ，为进一步进行余甘子种质资源的 RAPD分析奠定基础． 1 材料与方法 1．1 材料 余甘子主栽品种 “粉甘 ”成年树嫩叶采 自福建农林大学校园．取新