科研基金申请标书-立题依据范例3.doc

立题依据 研究目的和意义肝细胞癌（Hepatocellular carcinoma，HCC）是我国常见恶性肿瘤之一，严重威胁着人们的健康。 化疗在预防HCC复发和转移中发挥着不可替代的作用。多药耐药现象是影响HCC化疗的主要障碍。研究发现导致HCC发生多药耐药的机制之一是凋亡调控基因介导机制的紊乱。Survivin不仅与HCC的发生、发展、预后及复发密切相关，而且是凋亡调控基因介导机制中的一种新耐药相关凋亡基因。本项目是在原有的工作基础上，利用RNA干扰技术抑制与凋亡调控基因survivin的表达，逆转其多药耐药性，旨在为进一步明确HCC多药耐药和逆转多药耐药机制的研究提供理论基础，同时为临床解决化疗耐药的“瓶颈”提供有益探讨，也为其他恶性肿瘤化疗耐药研究提供新的思路。国内、外研究现状和发展趋势肝细胞性肝癌( Hepatocellular carcinoma ，HCC)是世界上最常见的恶性肿瘤之一，占原发性肝癌95%，每年约有55万人被确诊为HCC，以东南亚国家及非洲等地区高发。我国是HCC的高发区，死亡率占恶性肿瘤第二位，发病率亦有增高趋势。导致HCC的主要危险因素有肝炎病毒感染、肝硬化、长期进食被黄曲霉毒素污染的食物。由于HCC早期缺乏典型症状，起病隐匿，极易侵犯门静脉分支，癌栓经门静脉系统形成肝内播散，确诊时往往已处于进展期，预后很差，如不治疗常于半年内死亡，因而成为治疗上最困难的肿瘤之一[1-2]。目前对HCC有多种治疗方法可供选择，除手术切除、肝移植、射频消融、无水乙醇或乙酸注射、液氮冷冻、激光气化及微波热凝等方法外，化疗作为各种治疗的辅助治疗在预防复发和转移中发挥着不可替代的作用。HCC对多种化疗药均具有广泛的耐药性[3-4]，是阻碍HCC化疗效果的主要屏障。因此开展对HCC的多药耐药机理和逆转方法的研究具有极其重要的意义。多药耐药(multidrug resistance, MDR)是指肿瘤对未接触过的、结构不同、靶位各异的多种抗肿瘤药物也具有交叉耐药性。它是恶性肿瘤化疗治疗失败的主要原因。肿瘤细胞的抗药性两类:一是先天性,即肿瘤细胞对抗癌药物天然不敏感; 二是后天获得性,即肿瘤耐药细胞因抗癌药物的诱导及其他因素的激活产生抗药性。多药耐药的可能机制主要包括 除与膜糖蛋白介导的药物外排泵机制及酶介导机制外，还与凋亡调控基因介导机制密切相关[5]。抗肿瘤药物主要通过诱导细胞凋亡发挥作用, 其中与耐药相关的基因包括bcl-2 家族、Survivin、p53 、c-myc 等。肿瘤细胞的耐药是细胞凋亡的抑制, 参与细胞凋亡调控的基因的表达失控是导致肿瘤细胞对化疗药物耐受的原因之一。因此，沉默这些细胞调控基因的过表达能有效可增加肿瘤细胞对化疗药物的敏感性、克服耐药性的产生[6]。Survivin是凋亡抑制蛋白( inhibitors of apoptosis protein，IAP) 家族成员之一。由耶鲁大学的Altieri等在1997年应用效应细胞蛋白酶受体-1(effector cellproteasa receptor-1, EPR-1)的cDNA，通过杂交方法在人类基因组文库中筛选并鉴定出来[7]。Survivin的表达具有高度的肿瘤特异性, 在多数肿瘤组织中均有表达, 而在大多数正常组织中不表达，研究证实Survivin具有抗凋亡和调节细胞分裂的双重功能[8]。研究显示，survivin是迄今为止发现的最强的凋亡抑制因子[9]。目前研究已知的survivin抗凋亡的作用机制包括以下几个途径[10-11]:抑制效应蛋白caspase-3、caspase-7的激活和活性；抑制caspase-3的活性； 介导P21蛋白和caspase-3前酶复合物的形成；与第二个线粒体起源的caspase激活剂Samc/DIABLO分子结合。其中caspase-3是caspase家族中最重要的凋亡效应蛋白，其激活是凋亡信息转导的关键。Survivin区别于IAP家族其它成员的独特之处在于Survivin在分化成熟的正常组织中很少表达，而在HCC等大多数肿瘤组织中呈高表达[12]。Survivin不仅与肝癌细胞的生成、生长、增殖、 凋亡、血管生、演变成及预后明显相关[13-15 ]，而且与HCC耐药机制的形成有关，能增加肿瘤细胞对放疗的耐受性[16-17] , 因此抑制survivin的表达能干预肿瘤耐药的产生。通过阻止Survivin的表达能有效诱导细胞凋亡，以及促进对化疗药物的敏感性，并达到治疗肿瘤的目的，故以survivin 作为靶基因治疗具有重大意义。RNA 干扰（RNA interference, RNAi ) 现象首先由Fire 等[18]发现于秀丽隐杆线虫，随后相继在植物、真菌、果蝇及哺乳动物细胞内发现。R