第二十五章出凝血试验的自动化.doc

第二十五章　出凝血试验的自动化 ? 　　本章考点：　　出凝血试验的方法和原理　　一、凝血仪的检测原理和方法　　1.凝固法（也称为生物学法）：即将凝血因子或激活剂加入到血浆中，使血浆发生凝固，凝血仪记录血浆凝固过程中一系列的变化（如光、电、机械运动等），并将这些变化的信号转变成数据，计算机处理分析后得出检测结果。目前在凝血仪上使用的凝固法大致分为三类：　　（1）光学法：待测血浆在凝固过程中，纤维蛋白原逐渐转变为纤维蛋白，其理学性质也发生改变，透射光和散射光强度发生改变，凝血仪根据这种光学性质的改变来判断凝固终点。光学法可分为：透射比浊法和散射比浊法。　　图12　光学法（比浊法）检测原理示意图　　（2）粘度法：在待测血浆中加入小磁珠，利用变化的磁场使小磁珠产生运动，随血浆的凝固，血液粘度增加，小磁珠的运动逐渐减弱，仪器根据小磁珠运动强度的变化来确定凝固终点。　　（3）电流法：该法将待测血浆作为电路的一部分，由于纤维蛋白具有导电性，可利用电流的断与否来判断纤维蛋白的形成与否，即判断凝固终点。　　图13　手工法（上图）和粘度法检测原理示意图　　2.发色底物法：该法主要是利用测定产色物质的吸光度变化来推算所测定物质的含量。基本原理为：首先人工合成含某种活性酶裂解点的化合物，此化合物上连接有产色物质（如对硝基苯胺，PNA），待测血浆中含有活性酶或往样品中加入活性酶，化合物中的产色物质可被裂解下来，使待测样本出现颜色变化，根据此颜色变化可推算出被检物质的含量。一般产色物质选用PNA，游离的PNA呈黄色，测定波长为405nm，而连接PNA的化合物为无色。利用该法检测的物质有AT-Ⅲ、PLG、PC、PS等。　　图14　人工合成的化学发光底物的结构模式图　　3.免疫学法：利用抗原抗体的特异性结合反应来对被测物质进行定量。自动凝血仪多采用免疫比浊法进行测定，又分为透射免疫比浊法和散射免疫比浊法。　　二、血凝仪性能评价　　根据国际血液学标准化委员会（ICSH）血凝仪主要通过以下几方面进行性能评价：　　1.精密度：也称重复性测定，即评价血凝仪分析的偶然误差。评价时，可用相同或不同质控血浆或新鲜病人血浆在相同或不同时间内进行检测，分析批内，批间重复性及总重复性测定，最好采用高、中、低三个水平的样本进行测定（n≥15）。常见的血凝指标（PT、ARTT、FIB）的精密度性能要求见表2-33-1。　　2.线性：以质控物、定标物或混合血浆测定在不同时间稀释（4～5个浓度）时的各种自动血凝分析相关参数，可观察各种参数是否随血浆被稀释而相应减低。理想结果是不同程度稀释及其相应结果在直角坐标上应是一条通过原点的直线。例如大多数自动血凝仪测定纤维蛋白原的线性为0.5～9g／L。　　3.污染率：即不同浓度样品对测定结果的影响。采用Bioughton法测定，即高低2个活性／含量的血浆，先测定高值样品3次（H1、H2、H3），随后测定低值样品3次（L1、L2、L3）。携带污染率=[（L1-L3）／（H3-L3）]×100%。　　4.准确性：即以参考方法确定的参考品或校正品对血凝仪测定的准确性予以评价，定值参考品须由厂家提供或使用规定的校标物。美国国家临床实验室标准化委员会（NCCLS）提出PT、APTT、FIB的总允许误差要求（见表2-33-1）。准确性也可通过传统的回收率加以评价。回收率=回收浓度／加入浓度×l00%，其中回收浓度=测定浓度－基础浓度，加入浓度=标准液浓度×标准液量／（血浆量+标准液量）。　　5.相关性研究：也称可比性分析，主要取决于对比方法的性能。最好选择参考方法为对比方法。目前，由于大多数血凝分析参数缺乏参考方法，也可使用被评价血凝仪与已知性能并经校正的血凝仪作平行测定。如偏差为固定误差或比例误差，可能是仪器没有校准，重新校准后即可使用。如偏差缺乏规律性，则可能为仪器本身缺陷，用户难以解决。　　6.干扰：即血凝仪在有异常样品或干扰物存在情况下的抗干扰能力。干扰因素包括溶血、高脂血、高胆红素血等。　　习题5　过敏性紫癜的实验室检查中那项是异常的　　A.血小板计数　　B.血小板功能试验　　C.束臂试验　　D.凝血试验　　E.纤溶试验 　　[答疑编号500726250101] 『正确答案』C　　过敏性紫癜是一种变态反应性出血性疾病。临床上分为5型，即单纯紫癜型、关节型、腹型、肾型和混合型。本症缺乏特异性实验室检查。发作时可有白细胞数、中性或嗜酸性粒细胞增高，骨髓象、血小板计数、血小板功能试验、凝血和纤溶试验均正常。束臂试验阳性、血沉则增快、IgA增高。此外，病变血管免疫荧光检查可见IgA与补体复合物的颗粒沉积，对确诊有价值。 　　习题6　血小板生存时间缩短不说明　　A.血小板破坏增加　　B.血小板