《荧光光度法测定硫酸奎尼丁含量》实验报告.doc

重庆医科大学 生物分析化学 实验报告 年级： 院系：医学检验 班级： 组别：4 姓名： 学号： 实验名称：荧光光度法测定硫酸奎尼丁含量 实验目的 2.了解荧光产生及测量的过程 ； 3.掌握 4.掌握 实验原理，分子量为782.96，分子结构如图所示： 其结构分为喹啉环和喹啉碱两个部分，根据其喹啉环结构部分具有产生荧光的特性，采用荧光光度计测量其荧光强度，可实现硫酸奎尼丁含量的测定。 实验仪器与试剂 实验步骤 标准系列溶液及样品溶液配制： 按照下表配制硫酸奎尼丁标准系列溶液及样品溶液 编号 1 2 3 4 5 6（硫酸奎尼丁样品溶液） 100ug/ml硫酸奎尼丁标准溶液 1.00l 2.00ml 3.00ml 4.00ml 5.00ml 2.50ml 说明 以上溶液均用移液管移取至50ml容量瓶中用0.050mol/L硫酸溶液稀释至刻度并摇匀 系列标准溶液浓度 4ug/ml 6ug/ml 8ug/ml 10ug/ml --- 荧光光谱的绘制 将荧光波长调节为440nm，用1cm石英荧光比色皿，以5号溶液作为测定溶液，置于荧光光度计样品室中，盖上样品室盖，调节荧光光度计灵敏度，使其荧光强度读数在60-70左右，然后按照下表依次调节荧光波长，测定不同荧光波长下5号溶液的荧光强度；在坐标纸上以测定的荧光强度为纵坐标，荧光波长为横坐标，绘制荧光光谱，并在荧光光谱上找出最大荧光波长。 激发波长 365nm 荧光波长 380nm 390nm 400nm 410nm 420nm 430nm 440nm 450nm 460nm 荧光强度值 2.1 6.1 17.3 34.8 51.8 63.9 69.6 68.2 60.7 激发波长 365nm 荧光波长 470nm 480nm 490nm 500nm 510nm 520nm 530nm 540nm 550nm 荧光强度值 53.1 47.3 27.6 18.9 12.6 7.9 4.8 2.9 1.9 将荧光波长调节至440nm，用1cm石英荧光比色皿，装入0.050mol/L硫酸溶液，置于荧光光度计样品室中，记录其荧光强度。然后按照下表测定标准系列溶液和样品溶液荧光强度，平行测定三次。计算荧光强度的平均值；在坐标纸上以荧光强度的平均值为纵坐标，系列标准溶液的浓度为横坐标制图，绘制标准曲线。 1.初始值 编号 1 2 3 4 5 6（样品） 荧光强度F1 14.8 30.5 44.8 57.3 70.1 17.5 荧光强度F2 14.9 30.6 45.2 57.8 69.8 17.4 荧光强度F3 14.9 30.6 45 57.8 69.9 17.6 F平均值 14.9 30.6 45 57.6 69.9 17.5 编号 1 2 3 4 5 6（样品） 荧光强度F1 14.3 30 44.3 56.8 69.6 17 荧光强度F2 14.4 30.1 44.7 57.3 69.3 16.9 荧光强度F3 14.4 30.1 44.5 57.3 69.4 17.1 F平均值 14.4 30.1 44.5 57.1 69.4 17 实验数据处理 标准曲线 3.样品溶液中的溶液奎尼丁含量计算 根据6号样品溶液荧光强度测定的平均值，在标准曲线上采用作图法求出其对应的浓度值，采用下式计算样品溶液中硫酸奎尼丁的含量。 = 实验注意事项： 测定系列标准溶液和样品溶液时，必须使用同一只比色皿； 比色皿放入荧光光度计样品室前，必须用吸水纸将外表面擦拭干净； 3.比色皿在换装不同浓度溶液时，必须用待测溶液润洗至少三次； 4.在比色皿未放入荧光光度计测定光路时，必须将样品室舱盖打开； 5.调节仪器的灵敏度时应根据仪器的具体要求选择相应的档位，使其荧光强度读数在60-70左右。 6.实验过程中，有一调零步骤，可不必调节读数为零，而在以后的测量过程中均减基础荧光强度值F0及可，以抵消背景吸收。