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流式细胞仪及其临床应用 To help all people live healthy lives 1973年BD推出世界第一台流式细胞仪 FACS I（Fluorescence Activated Cell Sorter） 1980年中国的第一台流式细胞仪FACS II 生物学、免疫学、遗传学、药理学、肿瘤学、血液学、临床检验等领域 FACS流式细胞仪市场占有率：全球75%，中国70% 台式机 —— FACSCalibur 双激光：488nm/635nm 四荧光六分析参数 动化程度高 分析速度快 灵活的设计 细胞分选系统 细胞富集系统 大型机 —— FACS Vantage SE 多激光多波长 八特征参数 设计灵活 高速分选 单细胞点对点分选 流式细胞术的基本概念 流式细胞术（Flow Cytometry, 简称FCM）是一种可以快速、准确、客观，并且同时检测单个微粒（通常是细胞）的多项特性，并加以定量的技术，同时可以对特定群体加以分选 研究对象为生物颗粒，如各种细胞、微生物及人工合成微球等 研究的微粒特性包括多种物理及生物学特征，并加以定量 流式细胞仪仪器结构 液流系统 光学系统 激光光源 光收集系统 电子系统 光电转换 数据处理系统 细胞分选系统 流式细胞仪的检测范围 细胞结构 细胞大小 细胞粒度 细胞表面面积 核浆比例 DNA含量与细胞周期 RNA含量 蛋白质含量 细胞功能 细胞表面/胞浆/核的特异性抗原 细胞活性 细胞内细胞因子 酶活性 激素结合位点 细胞受体 流式细胞仪的检测信号 散射光信号 FSC，前向角散射光，代表细胞大小 SSC，侧向角散射光，代表细胞粒度 流式细胞仪的检测信号 荧光信号 使用荧光标记的单克隆抗体染色，做多色分析 荧光信号的强弱，反映了细胞抗原的表达含量 双激光立体空间激发系统 双激光立体空间激发系统 信号脉冲处理Pulse Processing（DDM） DDM (Doublet　Discrimination Module) 双粘体辨别—DNA分析的解决之道 通过信号脉冲（FL2-W和FL2-A）分析区别实体组织标本中的粘连细胞，最大程度减少假阳性 流式细胞仪的应用 淋巴细胞免疫分型 淋巴细胞亚群分析 CD4绝对计数 HIV的诊断与研究 淋巴细胞 CD4/CD8分析 CD4绝对计数 T细胞活化 细胞移植的交叉配型和免疫状态监测 流式细胞仪的应用 免疫功能和免疫调控的研究 淋巴细胞和单核细胞的活化 细胞因子的研究 淋巴细胞的增殖 树突状细胞的研究 HLA-B27检测 流式细胞仪的应用 白血病和淋巴瘤免疫分型 残留白血病 造血干细胞计数 PNH诊断 网织红细胞分析 血小板分析 血小板膜糖蛋白分子的表达 血小板活化 网织血小板分析 流式细胞仪的应用 细胞周期分析 肿瘤相关基因表达的研究 多药耐药基因的研究 细胞凋亡的分析 凋亡细胞的分析 凋亡相关蛋白的分析 淋巴细胞亚群分析 使用特异的单克隆抗体，进行多色分析，同时分析淋巴细胞上多种抗原的表达，可以将淋巴细胞亚群区分开，进行定量分析 各淋巴细胞亚群的百分含量 淋巴细胞亚群的绝对计数 临床意义 了解在不同情况下体内免疫功能状态 辅助临床疾病的诊断 探索疾病的发病机理、病程、预后 监测、指导临床治疗方案 免疫系统疾病 免疫缺陷病，AIDS 移植病人排斥反应或移植物抗宿主反应的检测 肿瘤病人化疗后免疫力检测 淋巴细胞亚群分析 根据功能，淋巴细胞主要分为 B淋巴细胞（CD19+），与体液免疫有关 T淋巴细胞（CD3+），与细胞免疫有关 NK细胞（CD3-CD16+56+），行驶免疫监控功能 根据CD4、CD8表达，T淋巴细胞又分为 T辅助/诱导细胞（CD3+CD4+） T抑制/细胞毒性细胞（CD3+CD8+） Th/Ts升高：自身免疫性疾病（类风湿性关节炎、SLE） Th/Ts降低：病毒感染、恶性肿瘤、再生障碍性贫血 活化T淋巴细胞：HLA-DR、CD38等 SimulTEST IMK-Lymphocyte淋巴细胞双色分析 使用双色分析试剂 样本使用EDTA抗凝全血，用血量600uL 使用SimulSET自动软件，进行样本的获取和分析 SimulSET软件自动做质量检查，帮助发现样本运输、处理等过程中造成的错误 医生报告T、B、NK淋巴细胞及TH、TS百分含量和H/S比值，并报告参考值范围 SimulTEST IMK-Lymphocyte淋巴细胞双色分析 CD45/CD14，Leucogate：确定淋巴细胞门，评估门的有效性，并自动计算淋巴细胞亚群占门内淋巴细胞的比例，排除门内杂细胞的干扰 ?1/?2a，阴性对照：确定淋巴细胞的阴性界值，评估实验的非特异染色 CD3/CD19：分析T淋巴细胞和B淋巴细胞