补骨脂素和异骨脂素的提取分离与检识.doc

补骨脂中补骨脂素和异补骨脂素的提取分离与检识 一．目的要求 1．掌握用溶剂法提取香豆素类化合物的操作技术。 2．通过补骨脂素和异补骨脂素的分离，熟悉干柱色谱的操作技术。 3．掌握香豆素类化合物的检识方法。 二．实验原理 补骨脂 为豆科植物补骨脂Psoralea corylifolia L.的干燥成熟果实，全国各地多有栽培。含有多种呋喃香豆素类成分，主要含补骨脂内酯 （补骨脂素）、异补骨脂内酯 （异补骨脂素）和补骨脂次素等。其中补骨脂素和异补骨脂素为抗白癜风的主要有效成分，具有光敏性质。 1.补骨脂素(psoralen) 又称补骨脂内酯，分子式C11H6O3，分子量186.16。无色针状结晶（乙醇），mp.189～190℃，有挥发性。溶于甲醇、乙醇、苯、氯仿、丙酮；微溶于水、乙醚和石油醚。 2.异补骨脂素(isopsoralen) 分子式 C11H6O3，分子量186.16。无色针状结晶，mp.137～138℃，溶于甲醇、乙醇、丙酮、苯、氯仿，微溶于水、乙醚，难溶于冷石油醚。 补骨脂素 异补骨脂 三．实验内容 1.提取 称取补骨脂粗粉200g，放入1000ml烧瓶中，加入50％乙醇500ml，热回流1h, 过滤，回收乙醇至无醇味，放置过夜，倾去上清液，得棕黑色粘稠物。将棕黑色粘稠物加80ml甲醇溶解，加少许活性炭，回流l0min，趁热抽滤，滤液回收甲醇至小体积，放置析晶 精制 将上述粗品加适量甲醇(3：100的比例)溶解，加少许活性炭，回流l0min，趁热抽滤，滤液放冷析晶，滤取结晶，少量甲醇淋洗，80oC以下干燥即得补骨脂素精品③。 3.补骨脂素和异补骨脂素的分离 取色谱用中性氧化铝40g，装于直径1.6cm*30cm的色谱柱中。取补骨脂素精品甲醇液约1-2ml，加样，以石油醚-乙酸乙酯（1：2）作洗脱剂，洗脱，每20ml为一溜份，各溜份回收溶剂后，用薄层板检查，和标准品对比，于紫外光灯下观察荧光与颜色。 4.鉴定 1．呈色反应 (1)异羟肟酸铁反应 取补骨脂素精品少量，置于试管中，加入7％盐酸羟胺甲醇溶液2滴～3滴，再加10％氢氧化钾甲醇溶液2滴～3滴，于水浴上加热数分钟，冷却，用盐酸调至pH3～4，加1％三氯化铁试液1滴～2滴，观察溶液颜色。 (2)开环闭环试验 取样品少许加稀氢氧化钠溶液1m1—2m1，加热，观察现象；再加稀盐酸试液几滴，观察所产生现象。 (3)荧光 取样品少许溶于氯仿中，用毛细管点于滤纸上，于紫外光灯下观察荧光与颜色。 2．薄层色谱鉴定 薄层板：硅胶G—CMC-Na板。 点样：补骨脂素精品乙醇液、干柱色谱分得的两样品乙醇液、补骨脂素对照品乙醇液及异补骨脂素对照品乙醇液。 展开剂：石油醚一乙酸乙酯(2：3)。 展开方式：上行展开。 显色：在紫外光灯(365nm)下观察荧光斑点。 四．实验说明及注意事项 提取药材应是未炮制过的补骨脂种子,其补骨脂素和异补骨脂素等成分含量较高。 采用75%乙醇提取的产率较高，但因补骨脂中大量脂溶性物质被溶解，使提取液浓缩后过于粘稠，过滤较困难，增加实验难度，杂质多而沉淀外观差。采用50%乙醇提取，产率略低，但其它二方面较佳，特别是实验难度低，在生产上有较大优势 ，因此采用50%乙醇提取优于用75%乙醇。 3.补骨脂素和异补骨脂素含内酯结构，具有内酯类成分的通性，可用碱提酸沉取，但因补骨脂种子中含有大量油脂和糖类成分，易与碱水发生皂化反应和形成胶状物，致使难以滤过，降低收得率，故选用50％乙醇提取而不用碱溶酸沉法提取。 参考文献： 1张红莲,王雅楠,王建华.补骨脂的化学成分及药理活性研究概况[A]. 天然产物研究与开发，2010，22：909-913, 918 罗志冬,郭晏华.补骨脂有效成分提取工艺的考察[A].中国新药杂志，2007，16(9)：705-708 3.陈业高,于丽丽,黄荣.补骨脂化学成分的分离与鉴定[A].云南化工，2005，32(2)：3-5. 4.刘烨,白炎晶,陈亚云,赵玉英.中药补骨脂化学成分的研究[A].中国中药杂志，2008，33(12)：1410-1412 5.洪永福等，补骨脂中补骨脂素和异补骨脂素的分离和鉴定，药学通报，(10)1979，447页． 6.翼春如等编，中药化学实验技术与实验，郑州，河南科学技术出版社，1986，291页．