亲子鉴定与个体识别.ppt

亲子鉴定的基本原理和方法 荣 媛 whushine@163.com 武汉大学中南医院 检验科法医司法鉴定所 亲子鉴定发展概况 亲子鉴定与遗传标记 亲子鉴定：应用生物学技术方法来检测遗传标记，并依据遗传学理论进行分析，从而对被检者之间是否存在生物学亲缘关系所作的科学判定，实质是一种特殊的个体识别 蛋白标记： 红细胞ABO,Ph,MN,Kell,Duffy,P等21个血型系统  白细胞HLA-A，-B，-C，-D，-DP，-DQ，-DR 蛋白质遗传标记（血型检查） 由等位基因决定的红细胞表面抗原的差异，为最早用于亲子鉴定的遗传标记，有ABO、MN、P、Rh等21个血型系统。 特点： 遗传性状简单，符合孟德尔遗传规律 遗传多态性，不易受年龄、性别、疾病影响 操作简单、重复性好，结果明确 ABO血型检查 人的ABO血型是受A,B,O三个复等位基因控制的，O为隐性基因，A、B为显性基因。 决定ABO血型的基因型AO,AA,BO,BB,OO,AB等6种，表现型有4种：A型、B型、 AB型和O型；根据孟德尔遗传规律，即可计算出孩子的可能血型的概率。 红细胞ABO血型检查 蛋白质遗传标记检测的局限性 对检材需要量大，且对时限要求较高，蛋白质容易失活而得不到理想的结果，不适用于陈旧、微量检材（HLA分型要求采血后16--24小时内必须检验） 多态性信息含量有限，鉴别能力有限，只能用于父权排除，准确率较低，不宜用于父权肯定和同一认定 存在有生理或病理性变异（如：A，O型血的人受大肠杆菌感染后B抗原的检测可能呈阳性） DNA分子遗传标记的检测 DNA指纹技术（RFLP）：第一代遗传标记 PCR分型技术：第二、三代遗传标记的检测(微卫星STR位点和单核苷酸多态性SNP) DNA指纹技术（RFLP） 1985 英国 Jefferys Nature 人源小卫星 DNA 用作基因探针，同人体核 DNA 的酶切片段杂交，获得了由多个位点上的等位基因组成的长度不等的杂交带图纹，这种图纹极少有两个人完全相同，故称为 DNA指纹 实验程序：基因组DNA的提取 限制性内切酶消化酶切 电泳分离 印迹转移 探针制备和标记 分子杂交和自显影 DNA指纹技术（RFLP） 实验结果（DNA指纹图谱）： 优点：群体多态性高，稳定遗传，孟德尔遗传 缺点：操作繁琐、对检材的质、量要求较高、灵敏度低、没有种属特异性 PCR分型技术（现代DNA亲子鉴定方法） PCR扩增序列多态性标记（PCR-SNP分析） Apo(a)基因 (TTTTA)4 76bp (TTTTA)4 TTTTA 81bp (TTTTA)4 TTTTA TTTTA TTTTA 91bp (TTTTA)4 TTTTA TTTTA TTTTA TTTTA 96bp (TTTTA)4 TTTTA TTTTA TTTTA TTTTA TTTTA 101bp (TTTTA)4 TTTTA TTTTA TTTTA TTTTA TTTTA TTTTA 106bp (TTTTA)4 TTTTA TTTTA TTTTA TTTTA TTTTA TTTTA TTTTA 111bp DNA条带、重复次数与遗传的关系 STR等位基因命名 等位基因通过PCR产物长度来区分和命名 ABI遗传分析仪家族 3130遗传分析仪的正面结构 遗传分析仪的基本原理 技术核心（电泳与检测同时进行） 毛细管电泳技术：PCR产物片段越长，迁移越慢，到达荧光检测窗口所需要的时间越长