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* Sham则认为WS4患者的巨结肠阻塞的长度和严重程度与SOX10突变位点相关，在3、4号外显子的突变导致的WS4巨结肠的表型要较5号外显子的突变的表型严重，即越短的突变蛋白产生的巨结肠表型越轻，越长的突变蛋白产生的巨结肠表型越严重。 * E248fs随时间的延长其表达量逐渐减少，与野生SOX10相比在CHX抑制后8h明显减少（P0.01），说明E248fs蛋白比野生SOX10蛋白衰减加快。 CHX： Cycloheximide（放线菌酮）抑制蛋白合成 * Sham则认为WS4患者的巨结肠阻塞的长度和严重程度与SOX10突变位点相关，在3、4号外显子的突变导致的WS4巨结肠的表型要较5号外显子的突变的表型严重，即越短的突变蛋白产生的巨结肠表型越轻，越长的突变蛋白产生的巨结肠表型越严重。 * Summary of functional analysis in our studies. DN: dominant negative * 酵母双杂交 Surface Plasmon Resonance (SPR，表面等离子体共振) One interaction partner (Y) is bound to the metal film while the other (red balls) partner Is injected over the surface. Amount of bound protein is quantified based upon angle of reflected light. Real time association and dissociation of a protein-protein interaction can be quantified. Surface Plasmon Resonance (SPR) F?rster/Fluorescent Resonance Energy Transfer (FRET) a non-radiative, dipole-dipole coupling process, transfer energy from an excited donor fluorophore to an acceptor fluorophore in very close proximity (typically within 10nm) FRET 研究结果 2. PAX3与SOX10相互作用的免疫共沉淀检测 Zhang H, et al. Hum Genet, 2012,131:491-503. 课程提纲 蛋白质加标签 (Tag); 定点突变； 转染; 亚细胞定位； Reporter assay； DNA-蛋白质相互作用； 蛋白质相互作用； 蛋白质半衰期。 研究结果 E248fs突变对野生SOX10蛋白产生显性负效应作用 SOX10基因突变与WS 显性负效应 WS4/PCWH SOX10 WS2？ Sham, et al. J Med Genet, 2001 . Inoue, et al. Nature Genet, 2004. Pulse Chase Label proteins with isotopes (C14, H3, S35 et al); Lyse cells at various time after labelling; Immunoprecipitate the target proteins; SDS研究结果 E248fs蛋白与野生SOX10蛋白半衰期比较 Zhang H, et al. Hum Genet, 2012,131:491-503. SOX10基因突变与WS 显性负效应 WS2 半衰期较野生SOX10变短 降解较野生SOX10加快 单倍体剂量不足 SOX10 基因 分型 Western blot 荧光素酶活性 亚细胞定位 DNA结合 与 SOX10/PAX3 相互作用 PAX3 = ++ 细胞核 + + H80D WS1 = + 细胞核 + + H186fs WS1 = - 细胞核、细胞质 - + SOX10 = ++ 细胞核 + + E248fs WS2 = - 细胞核 + + G37fs WS2 = - 细胞核、细胞质 - - G38fs WS2 = - 细胞核、细胞质 - - R43X WS2 = - 细胞核、细胞质 - - W85X WS4 = - 细胞核、细胞质 - - 结论 Please visit our website for more information. 遗传异质性(heterogeneity)是指表现型一致的个体或同种疾病临床表现相同，但可能具有不同的基因型，称为遗传异质性。不同的基因