一个抗疱疹病毒被人源化的IgG1抗体糖蛋白D.doc

一个抗疱疹病毒被人源化的IgG1抗体糖蛋白D (抗gd,即免疫球蛋白g)是来自于基因泰克(南旧金山,CA)，通过Chizzonite(间接Iodogen)方法和我使用先前发表的方法进行的放射性标记。鼠血清白蛋白均来自西格玛奥德里奇(圣路易斯,MO)，并且对于反gd我使用相同的放射性标记方法标记 (见上图)。计量解决方案也准备了通过混合碱白蛋白和碱抗gD的磷酸(盐)缓冲盐水(pH7.3)。 动物模型 所有实验动物的研究受经基因泰克实验室动物研究(LAR)的动物饲养和使用委员会（IACUC）评估和认准的协议的指导。SOD1G93A突变体(Tg(SOD1 * G93A)1 gur / J(JAX:002726))和控制(B6SJL-Tg(SOD1)2 gur / J(JAX:002 297))小鼠从杰克逊实验室获得。所有的研究利用13-18周大的SOD1G93A和年龄相仿的控制(SOD1WT)小鼠。重要的是, SOD1G93A突变小鼠开始展览血液-脊髓屏障超微结构中断，年龄约在13周。 血液流动。在大脑和其他组织中，血液流动的相对比率是由牺牲小鼠静脉注射185kBq数量的两个不同的血液流标记后整整90s所决定的:99mTc-HMPAO,穿越血脑屏障,86RbCl,被排除在血脑屏障之外。99mTc-HMPAO是一种小的亲脂性的金属配体复合体，他的功能是作为大脑血液流动很稳定的指示器，然而它也曾被用作衡量肿瘤血液的流动比率。阳离子铷无线探针(e.g.,81Rb+,82Rb+,86Rb+)是单阳离子钾的极地类似物，曾被成功用作为肿瘤灌注替代物，由于他们的相对渗透性只通过钾离子以一个慢的平稳的速率传输，因此也被用作为血脑屏障完整的标记。在异氟醚麻醉下通过子宫颈转位安乐死之后，由于在适当的能力窗口里的放射性，组织样本被迅速收集和统计。计算组织中每一克剂量里所注入的99mTc-HMPAO和86Rb+百分含量，并可能被考虑与血液流动速率成比例。统计的意义（p0.05）取决于非配对t检验或者用在此之后Tukey的测试带来的差异分析(ANOVA)，视情况而定。 蛋白质的生物分布研究 静脉注射随同给药I白蛋白和I抗gD两个小时候，老鼠在异氟醚麻醉下被杀死了，靠开胸手术来维持完整的脊髓收集。在期望中选择2小时时间点，它会留出足够的时间来检测血液中枢神经系统障碍中任何重大中断，在稍后的时间通透性由于流出可能不太明显。小心取出脑，解剖成大脑、小脑和脑干。整个脊髓被椎骨刷新了并收集起来，其次是脾、肝、肾、小肠（3公分的回肠）、心脏、肺、肌肉（腓肠肌）、皮肤（背）。组织在生理盐水中漂洗，吸干，称重，并在- 70°C的干冰上冷冻存储。如前面所述，用自动γ计数器进行辐射分析。统计的意义（p0.05）取决于非配对t检验或者用在此之后Tukey的测试带来的差异分析(ANOVA)，视情况而定。 血管容积 如前面所述，脑和其他组织中红细胞的分布通过SOD1相对于对照组小鼠来进行测定，采用间接生动的方法用Tc来进行红细胞的标记。简言之，供体小鼠在接受55.5活度的TC酸整整30分钟后，随后是TechneScan PYP（焦磷酸亚锡）非放射性剂量。1小时后，这些供体小鼠全部血液被耗尽死亡，合并，并重新注入（每只小鼠约0.5活度）到活泼的易接受的小鼠体内。1小时后，及时收集从受体小鼠终端器官收获的组织样品，并在适当的γ射线能量窗口进行放射性计数。计算每个收获的组织中注射Tc-RBC（％ID/ g）的每克的百分比。此外，通过归一化的Tc-RBC的血药浓度，如以前报告，计算各组织的血管体积。统计的意义（p0.05）取决于非配对t检验。 结论 血液流动 肺吸收的亲脂性血流标记，Tc-HMPAO，高于任何其他控制和SOD1小鼠组织中，％ID/g值分别为26±4和27±5（图1）。这些值与先前文献报道的小鼠中BALB/c值25.42±3.54％ID/g相符，符合放射性药物进入肺血管皮细胞内已知的提取物。对照组（2.7±0.5）和SOD1G93A突变体（2.8±0.9）小鼠之间（图1）检测到了Tc-HMPAO脑摄取量没有差异，表示为％ID/克，，尽管这两个值稍低于文献值4.21±0.50％：ID/克。有趣的是，在血液保留和肾脏吸收显着性（P 0.05）差异存在，表明SOD1G93A突变和由此产生的表型可具有对肾功能的影响。具体而言，在肾的摄取量控制为11±18±1％ID / g和血液中的浓度为13±2和17±2％ID/ mL的观察并且SOD1小鼠是分开的。 图1。99m Tc-HMPAO或86Rb+的注射剂量的百分比为每克（％ID/ g）作为脑灌注和血 - 脑屏障完整性的测量，分别在90秒静脉给药后，转基因小鼠表达人野生型SOD1（对照）和