混合斑检验10用.ppt

教 学 要 求 掌握 确证精液及阴道分泌液混合斑的方法及个人识别的原则与方法，包括ABO血型、血清型、酶型及DNA多态性测定。多个个体血液混合斑鉴定方法，包括ABO血型测定、DNA多态性检验。 熟悉 混合斑的概念、混合斑的种类及混合斑检验的意义。 了解 混合斑的血清型与酶型测定 笫一节 混合斑的特点和检验目的 一、概念 法医物证学的混合斑(mixed stain或mixture) 指两名或两名以上个体的体液、分泌液混合形成的斑痕。 二、分类 （一）由不同个体的同一种体液、分泌液混合而成，最常见为混合血斑； （二）由不同个体的不同体液、分泌液混合而成，最常见为精液与阴道分泌液组成的混合斑。 三、可能有混合斑的检材 （一）性犯罪案件检材，包括阴道拭子、内裤、卫生纸、床单、外生殖器拭子及其他各类物品，这类检材多含有精子及阴道上皮细胞，属男、女个体成分的混合物； （二）多人受伤的现场血迹，凶器、当事人身上或衣物上的血痕，多为混合血痕； (三）咬痕拭子含有咬者的口腔上皮细胞和被咬者的皮肤细胞； （四）指甲垢，含有本人和被抓者的细胞； （五）血衣有另一个人的汗液、唾液或尿液。 四、检验的步骤 （一）首先要确证检材是否为混合斑； （二）如果为混合斑，则要确定由哪几种成分组成、组成的个体数等； （三）确定混合斑中各组成成分的遗传标记，进行个人识别。  五、注意事项 由于混合斑所测出的遗传标记是混合斑各组成成分遗传标记的总和，只有在与参照样本比较的情况下，才能推断混合斑各组成成分的遗传标记。 尽可能了解案情，提取相关人员的血液（痕）、唾液（斑）等检材。 尽可能同时同一条件下检测，进行对比推断。 案例 （1）如某一个嫌疑人强奸一个女子，现场提取的精液/阴道液混合斑，某一STR基因座DNA分型结果为3、5、9、10； （2）受害人血液基因型为3、9，则推测精斑基因型为5、10； （3）若嫌疑人的基因型为5、10，则不能排除其为作案人。 第二节 精液与阴道液混合斑检验 是物证检验中最常见的混合斑，常见于性犯罪案件。 检验的目的主要是检测精液的遗传标记，确定嫌疑人的基因型；少数要求确定阴道分泌液的遗传标记，认定受害者。 一、混合斑的确证 (一) 精斑的确证——利用精斑的确证试验 (二) 阴道液斑的确证 1. 细胞学检查 2. 阴道肽酶测定 1.细胞学检查 斑痕浸液离心，沉淀物涂片，HE染色结果： （1）阴道上皮细胞：大而扁平、形态不规则、胞浆红染，有的为己完全角化无核。 （2）若同时查见精子，为阴道分泌液与精液的混合斑。 可根据嗜碘试验将富含糖原的阴道上皮细胞与口腔粘膜上皮细胞相鉴别。 嗜碘试验 斑痕沉淀物涂片干燥，加1~2滴Lugol’s碘液 ，或将玻片翻转盖在盛有Lugol’s碘液的小皿上，2~3min后镜检。 阴道上皮细胞被碘染成红褐色或深黄褐色，口腔粘膜细胞不着色。 注意：男性尿道口上皮细胞也呈碘染色法阳性，故在检查阴茎上有无阴道上皮细胞附着时需慎重。 2.阴道肽酶测定 肽酶（Peptidase）催化肽键水解的酶，阴道肽酶（vaginal peptidase,Vp）能水解L-缬氨酰基-L-亮氨酸及其他二肽底物. 仅存在于女性生殖道分泌液中，包括输卵管和子宫内膜分泌液、子宫颈管粘液及阴道粘膜分泌液中，与年龄、性活动及月经周期无关。 阴道肽酶测定： 用淀粉凝胶电泳检测，近正极有一条Vp蓝紫色谱带。 Vp检测阳性率64％ ，阴性不能否定阴道 液存在。 在阴道液斑中，Vp的检出期限为7个月。 Vp不存在于血液及其他人体液中，月 经血及精液等均不影响其检出。 二、混合班中精液成分的个人识别 强奸案件现场提取的精斑多数混有阴道液。阴道液也能测定ABH血型物质，一些具有多态性的蛋白和酶，从阴道脱落上皮细胞也能获得DNA进行多态性分析。 混合斑所测出的遗传标记是精液与阴道液遗传标记的总和，鉴定混合斑，应取受害人和嫌疑人的血液、唾液等检材做参照样本。对于已婚的被害人，提取其丈夫的对照样本。 混合斑鉴定三类方法比较 （一）对比推断法 1. DNA分型 混合斑个人识别的常规技术：STR基因座分型技术 对混合斑直接提取DNA进行STR基因座分型，结果会得到男性案犯和女性受害人的混合分型图谱