基因工程___电子版.doc

作　者：吴乃虎出版社：高等教育出版社 第一章　基因工程概述　第一节　基因操作与基因工程　　一、基因操作与基因工程的关系　　二、基因工程的诞生与发展　第二节　基因工程是生物科学发展的必然产物　　一、基因是基因重组的物质基础　　二、DNA的结构和功能　　三、基因操作技术的发展促进基因工程的诞生和发展　　四、基因工程的内容　第三节　基因的结构——基因操作的理论基础　　一、基因的结构组成对基因操作的影响　　二、基因克隆的通用策略第一篇　基因操作原理　第二章　分子克隆工具酶　　第一节　限制性内切酶　　　一、限制与修饰　　　二、限制酶识别的序列　　　三、限制酶产生的末端　　　四、DNA末端长度对限制酶切割的影响　　　五、位点偏爱　　　六、酶切反应条件　　　七、星星活性　　　八、单链DNA的切割　　　九、酶切位点的引入　　　十、影响酶活性的因素　　　十一、酶切位点在基因组中分布的不均一性　　第二节　甲基化酶　　　一、甲基化酶的种类　　　二、依赖于甲基化的限制系统　　　三、甲基化对限制酶切的影响　　第三节　DNA聚合酶　　　一、大肠杆菌DNA聚合酶　　　二、KIenow DNA聚合酶　　　三、T4噬菌体DNA聚合酶　　　四、T7噬菌体DNA聚合酶　　　五、耐热DNA聚合酶　　　六、反转录酶　　　七、末端转移酶　　第四节　其他分子克隆工具酶　　　一、依赖于DNA的RNA聚合酶　　　二、连接酶　　　三、T4多核苷酸激酶　　　四、碱性磷酸酶　　　五、核酸酶　　　六、核酸酶抑制剂　　　七、琼脂糖酶　　　八、DNA结合蛋白　　　九、其他酶　第三章　分子克隆载体　　第一节　质粒载体　　　一、质粒的基本特性　　　二、标记基因　　　三、质粒载体的种类　　第二节　λ噬菌体载体　　　一、λ噬菌体的分子生物学　　　二、λ噬菌体载体的选择标记　　　……　第四章　人工染色体载体　第五章　表达载体　第六章　基因操作中大分子的分离和分析　第七章　基因芯片技术　第八章　PCR技术及其应用　第九章　DNA序列分析　第十章　DNA诱变　第十一章　DNA文库的构建和目的基因的筛选　第十二章　基因组研究技术第二篇　基因工程应用　第十三章　植物基因工程　第十四章　动物基因工程　第十五章　酵母基因工程　第十六章　细菌基因工程　第十七章　病毒基因工程　第十八章　医药基因工程　第十九章　基因工程产品的安全及其管理 第一章? 基因工程概述 第一节? 基因操作与基因工程 一、基因操作与基因工程的关系 基因操作（gene manipulation）：指对基因进行分离、分析、改造、检测、表达、重组和转移等操作的总称。 基因工程（gene engineering）：通过工具酶，在体外将目的基因、基因片段或其它DNA元件进行切割，与适当的载体进行连接和重组，导入相应受体细胞，并使外源基因进行复制和表达，定向改造受体生物性状或获得表达产物。 基因操作的核心是基因重组（gene recombination）技术，基因工程是基因操作、基因重组的核心内容和主要目的。 基因工程的遗传学效果：受体生物发生遗传信息或遗传性状的变化并能稳定遗传给下一代。 二、基因工程的诞生与发展 基因工程的诞生: 1972年美国斯坦福大学P. Berg用限制性内切核酸酶EcoRⅠ在体外对猿猴病毒SV40 DNA 和λ噬菌体DNA分别进行切割，然后用T4 DNA 连接酶将两种酶切片段连接起来，第一次在体外获得了包括SV40 和λDNA的重组DNA分子，并因此与F. Sanger分享了1980年诺贝尔化学奖。 1973年，美国斯坦福大学S. Cohen将R6-5质粒DNA (编码卡那霉素抗性基因)和pSC101质粒DNA (编码四环素抗性基因)分别用EcoRⅠ切割，然后用 T4 DNA 连接酶连接，将连接混合物转化大肠杆菌后，某些转化子菌落表现出双抗性特征。这是第一次基因克隆实验的成功，基因工程也就此宣告诞生。 基因工程诞生后的“沉默”：?????? 1、关于基因工程安全性的担忧与讨论： ?? A、生物污染: 1973年美国的公众第一次公开表示担心应用重组DNA技术可能会培养出具有潜在危险性的新型微生物，从而给人类带来难以预料的后果。基因工程刚诞生的几年内，发表反对意见的文章数远远高于利用此技术所做研究的文章数目。 P. Berg本人正是由于对人类生命安全的可能的危及的担忧而放弃了将重组基因转入大肠杆菌体内的设想。 1974年美国国立卫生研究院（NIH）考虑到重组DNA的潜在危险，提请Paul Berg博士组成一个重组DNA咨询委员会。同年7月发表公开信要求在没有弄清楚重组DNA所涉及的