A260、A230、A280的含义.docxVIP

A260/A280和A260/A230的含义A260nm是核酸最高吸收峰的吸收波长，最佳测量值的范围为0.1至1.0。如果不在此范围，稀释或浓缩样品，使之在此范围内；如果吸光度小于0.05，检查是否存在操作因素（如移液不准确，样品内有悬浮物等）影响。DNA样品的A260 吸光度值是否0.1。（请注意，这个值跟仪器无关，核酸的吸光度必需大于0.1，其值才有效和可靠，因为样品中的杂质和颗粒这些不纯物的干扰通常会对光有一定吸收，其值0.1）；朗伯－比尔定律：A 吸光值I0 入射光强度I 投射光强度c 吸光物质的摩尔浓度（mol/L）d 光通过的液层厚度（cm）ε 摩尔吸光系数（Lmol-1cm-1）2. A280nm是蛋白和酚类物质最高吸收峰的吸收波长，比值可进行核酸样品纯度评估：纯DNA的A260/A280比值为1.8，纯RNA为2.0。如果比值低，表示受到蛋白（芳香族）或酚类物质的污染，需要纯化样品。比值=1.5相当于50％蛋白质/DNA溶液3. A230nm是碳水化合物最高吸收峰的吸收波长，比值可进行核酸样品纯度评估：纯DNA和 RNA的A260/A230比值为2.5。若比值小于2.0标明样品被碳水化合物（糖类）、盐类或有机溶剂污染，需要纯化样品。A230产生负值主要是由于在很低DNA 浓度的溶液中的一些其他成分的干扰所导致的。在下一个测定中，需要降低样品的稀释度，A230的负值会被校正。4. A320nm或A340nm为检测溶液样品的浊度和其他干扰因子。该值应该接近0.0。如果不是，标明溶液中有悬浮物，需要纯化样品。纯样品的A320一般是 0。5. A260/A280和A260/A230是核酸纯度的指示值，纯度好的DNA，在pH7-8.5 下其比值应该在2.0 或2.5，A260 / A280的比值， 用于评估样品的纯度， 因为蛋白的吸收峰是280 nm。 纯净的样品比值大于1.8（DNA）或者2.0（RNA）。如果比值低于1.8 或者2.0，表示存在蛋白质或者酚类物质的影响。A230是多肽、芳香基团、苯酚和一些碳氢化合物的吸光度，A230表示样品中存在一些污染物，如碳水化合物、多肽、苯酚等，较纯净的核酸A260/A230的比值大于2.0 。A280是蛋白质的吸光度。纯净的DNA和RNA在A260和A280都有吸收值，但以260最高。而核酸提取过程中最主要的污染物蛋白质在A280处有强烈的吸收值，所以计算这两个吸收峰的比值就可以确定核酸的纯度。DNA的这个值一般是1.8～2.0，而RNA则是2.0。值得注意的是，这个比值并不能很好的反应出核酸的纯度，简单来说寡聚核酸会造成A260值升高，如果核酸有降解，则会导致A260/A280值上升。另外，如果A280值偏高，并不一定是蛋白污染。蛋白在A280有吸收值是因为其苯丙氨酸等氨基酸残基中所含有的苯环的缘故，所有含苯环的化合物都会在A280有吸收峰。所以如果A280升高虽然有最有可能是蛋白污染，但也有可能是其他苯环物质。如植物DNA提取过程中的多酚类物质污染。另外，如果要求高的话，我们还会要求测量A230的值，正常情况下，核酸的A260/A230和A260/A280是一致的，如果这个值上升则样品可能会含有多糖类的污染。