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复杂化合物的分离分析方法 一超高效液相色谱 （一）UPLC仪器 （二）基本信息 超高效液相色谱（Ultra Performance Liquid Chromatography\ UPLC）是分离科学中的一个全新类别，UPLC借助于HPLC（高效液相色法）的理论及原理，涵盖了小颗粒填料、非常低系统体积及快速检测手段等全新技术，增加了分析的通量、灵敏度及色谱峰容量。超高效液相色谱是一个新兴的领域，作为世界第一个商品化UPLC产品的Waters ACQUITY UPLCTM 超高效液相色谱系统在1996年问世，之后像安捷伦、岛津等公司也陆续开始生产超高效色谱仪。目前，超高效液相色谱仪已经开始逐渐地投入液相实验中。 超高效液相色谱法的原理与高效液相色谱法基本相同，所改变的地方有以下几点：小颗粒、高性能微粒固定相的出现。 高效液相色谱的色谱柱，例如常见的十八烷基硅胶键合柱，它的粒径是5um，而超高效液相色谱的色谱柱，会达到3.5um，甚至1.7um。这样的孔径更加利于物质分离 （2）超高压输液泵的使用。 由于使用的色谱柱粒径减小，使用时所产生的压力也自然成倍增大。故液相色谱的输液泵也相应改变成超高压的输液泵。 （3）高速采样速度的灵敏检测器。 （4）使用低扩散、低交叉污染自动进样器。配备了针内进样探头和压力辅助进样技术； （5）仪器整体系统优化设计。色谱工作站配备了多种软件平台，实现超高效液相分析方法与高效液相分析方法的自动转换。 与传统的HPLC相比，UPLC的速度、灵敏度及分离度分别是HPLC的9倍、3倍及1.7倍，它缩短了分析时间，同时减少了溶剂用量降低了分析成本。 不过由于实验过程中仪器内部压力过大，也会产生相对应的问题。例如泵的使用寿命会相对降低，仪器的连接部位老化速度加快，包括单向阀等部位零件容易出现问题等。 如今，超高效液相色谱仪主要应用于（1）药物分析 如天然产物中复杂组分的分析 （2）生化分析 如蛋白质、多肽、代谢组学等生化样品 （3）食品分析 如食品中农药残留的检测 （4）环境分析 如水中微囊藻毒素的检测 （5）其他 如化妆品中违禁品的检测 超高效液相色谱仪尤其对中药研究领域的发展是一个极大的促进。中药的组分复杂，分离困难等问题都可以通过超高效液相色谱法逐渐解决。在同样条件下，UPLC能分离的色谱峰比HPLC多出一倍还多。在同样条件下，UPLC的分辨率能够认出更多的色谱峰。UPLC和HPLC方法对丹参药材中丹酚酸B含量测定结果的比对 结果：两种方法所得含量测定结果一致。结论：超高效液相色谱方法能够替代高效液相色谱分析方法测定丹参药材中丹酚酸含量, 既 加快了分析速度, 达到了样品分析的高通量, 减少有机溶剂的使用, 又得到更高的分析灵敏度。（2）图谱说明： 2、HPLC、UPLC 测定芪参益气滴丸中5 个丹参活性成分含量的比较研究（3） 结果:UPLC的分析时间少于HPLC;5个物质在一定范围内均呈现良好线性,r均大于0.9998;2种方法的精密度、重复性、加样回收率和样品测定结果无显著性差异。结论:HPLC和UPLC 2种方法准确性、重复性均较好;UPLC分析比HPLC具有更加快速、高效的优势。 图1 对照品( A) 、样品( B) 与阴性样品( C) 的HPLC 与UPLC 图谱 Fig 1 HPLC and UPLC chromatograms of reference substances( A) ，samples ( B) and negative samples( C) 1． 丹参素( danshensu) 2． 原儿茶醛( protocatechualdehyde) 3． 迷迭香酸( rosmarinic acid) 4． 丹酚酸B( salvianolic acid B) 5． 丹酚酸A( salvianolic acid A) 3、化橘红黄酮类成分UPLC 与HPLC 指纹图谱的比较研究（4） 结果：分别建立了化橘红黄酮类成分的UPLC与HPLC指纹图谱共有模式。其中UPLC法标识出21个共有峰,HPLC法标识出17个共有峰,17批样品的相似度均大于0.9。 2种方法均可用于化橘红的质量控制,UPLC法较HPLC法更高效、快速、灵敏。? 0 11.43 22.86 34.29 45.72 57.14 68.57 80.00 t / min 图一17 批化橘红药材的HPLC 对照指纹图谱（标示出17 个共有峰） 0 1.14 2.29 3.43 4.57