免疫组化考试必备.docVIP

组织化学：在形态学基础上应用化学、物理和免疫学方法研究细胞、组织中物质的化学组成、分布和含量的一门学科；主要是通过以化学反应为主的染色方法在组织和细胞的原位上显示出各种物质的特殊性，并借助光镜和电镜观察组织和细胞的形态改变，探讨与功能、代谢变化的关系及其意义。 组织化学技术的基本要求：1、保持组织细胞良好形态结构； 2、高度特异性；3、高度灵敏性；4、反应产物定位精确、具稳定性；5、与周围对比鲜明，易于识别；6、方法简便、化时少、重复性好。 *常用的组织化学显色法：1、金属沉淀法--磷酸酶；2、偶氮偶联法--萘酚族化合物；3、Schiff氏反应--多糖（PAS反应）和DNA（Feulgen反应）；4、联苯胺反应--过氧化物酶检测；5、普鲁士蓝反应--含铁血黄素；6、甲 反应--脱氢酶。 金属沉淀法：利用金属化合物在反应过程中生成有色沉淀，借以辨认所检物质或酶的活性，如磷酸酶的显示法。 对组织化学方法的评价：@优点：能测组织中微量物质；取材小、反应较灵敏 @缺点：测定步骤较多、试剂昂贵；影响因素多 组织化学方法的应用：1、寻找病原微生物；2、帮助诊断和鉴别诊断；3、研究探讨发病机制；4、研究药物作用后的代谢改变等；5、为临床治疗提供治疗方案选择 *石蜡切片的制备：标本取材——组织固定——固定后处理——脱水——透明——浸蜡——包埋——切片——粘片——脱蜡——各级酒精——水洗——染色——封片。 *细胞标本：印片法、穿刺涂片法、体液沉淀涂片法、活细胞培养标本。注意事项：涂片用载玻片应先涂粘附剂，防止脱片；涂片时细胞应分布均匀、或用细胞离心涂片器。 标本取材的注意事项：1、材料新鲜、固定及时 2、防止挤压 3、注意组织大小及厚度（宜小而薄） 4、正确选择取材切面及部位 5、保持清洁，去除坏死物、血污、粘液等物质 6、去除不需要的组织如周围脂肪组织等 7、防止组织干燥 8、标本编号、分瓶存放、低温保存 固定：即标本取材后采用特定的试剂作用于细胞或组织，使其尽量保持生活时的形态和结构，该过程称为固定，该试剂即为固定剂。 标本固定的目的：1、防止组织自溶和腐败 2、使组织某些成分凝固或沉淀、变成不溶性物质，避免弥散，保持原有生活时形态 3、使组织硬化，便于制片 4、有利于染色反应 标本固定的优缺点：@优点：可保存形态结构；能长期保存； @缺点：物质损失；组织皱缩 ；影响常规染色； 固定剂的特性和作用：1、具相当穿透力 2、具媒染效果 3、固定剂与蛋白质间发生化学反应，改变分子结构，产生沉淀 4、使蛋白质变性成沉淀状态 5、使蛋白质凝胶化、不溶于水。 *甲醛类固定剂：@优点：渗透力强、收缩小 ；保存脂类和类脂体 ；价廉 @缺点; 福尔马林色素形成 ；PH酸性影响胞核着色 ；抗原决定簇被掩盖 *Carnoy液：由无水酒精60ml，氯仿30ml，冰醋酸10ml组成，混合后４℃保存备用；可保存糖原、尼氏小体等；对显示DNA、RNA效果很好。@优点：穿透力强，能快速固定，对胞核固定好，有固定兼脱水作用；@缺点：破坏红细胞。 标本固定的注意事项：1、固定组织应尽量小，一般应小于2.0×1.5×0.5 cm；固定液一般为组织体积的5~10倍 2、固定应及时、适时 3、选择合适的固定剂 4、注意固定时的温度，不宜过高。 *常用固定方法：1、浸泡固定 2、蒸汽固定 3、灌注固定 4、微波固定 石蜡切片的优缺点及注意事项：@优点：可使组织保存良好形态结构；能连续切片；能长期保存；@缺点：影响组织的抗原性；@注意事项：1、取材与固定 2、脱水、透明、浸蜡 冰冻切片的优缺点及注意事项：@优点：快速、简便；可保存抗原性和酶活性；@缺点：易形成冰晶，影响抗原定位；需特定仪器设备；不能长期贮存；不宜作常规病理切片检查及回顾性研究；@注意事项：防止冰晶形成；防止组织块失水；加温速融。 PAS染色(Periodic Acid Schiffs stain) 原理：过碘酸是一种强氧化剂。组织或细胞内存在的糖原或多糖类物质中的乙二醇基（CHOH-CHOH）由于过碘酸的氧化，断裂为两个醛基（CHO），然后与雪夫(Schiff)试剂中的无色品红结合，形成紫红色染料而沉积于组织或细胞内。经淀粉酶消化后PAS仍阳性，可见于糖原以外的糖类。 结果：阳性物质成紫红色，颗粒或均质团块状，红色深浅反应含糖原多少，胞核呈绿色。 应用：1、证明与鉴别细胞内空泡状变性 2、心肌病变及其它心血管疾病的诊断和研究 3、糖原沉积病的诊断和研究 4、糖尿病的诊断和研究 5、用于某些肿瘤的诊断与鉴别 奥蓝—过碘酸Schiff 染色（AB-PAS染色法） 原理：Alcian blue是