干细胞分化为上皮样细胞的初步研究.pdf

·719· ．论著． 人骨髓间充质干细胞分化为上皮样 细胞的初步研究 侯光辉叶楠吴静徐锦堂施文建陈义刘小浩张泽华 marrow bone 【摘要】 目的 应用猪板层角膜做载体将人骨髓问充质干细胞(human mesenehyma]stemcells，hMSC)跨胚层诱导为上皮样细胞，甚至角膜上皮样细胞，初步探讨hMSC作为 构建组织工程角膜种子细胞的可行性。方法实验研究。用密度梯度离心培养技术结合贴壁培养法 分离纯化hMSC并传代，对体外培养的hMSC进行免疫表型鉴定。将传代后的hMSC接种于去上皮的 猪角膜基质片前弹力层表面培养诱导分化，免疫荧光检测角膜上皮细胞标志物角蛋白12(CKl2)以 及角膜缘干细胞标记物ABCG2和CKl9的表达。运用体外培养的方法使种植在前弹力层表面的细 胞复层化。待细胞融合形成单层后，置入插入式培养皿中进行气液界面培养。培养4周后进行HE 染色及免疫组织化学检测，光镜下观察其复层情况。结果获得的hMSC可以在体外培养扩增，表现 出很强的增殖潜能。流式细胞仪示：培养的hMSCCD45阳性率为0．06％，CD34为0．41％，CD44为 ABCG2。运用气液界面培养法进行体外复层的结果显示可以形成1—2层的上皮样细胞，并很可能为 角膜上皮样细胞。结论在本实验的诱导条件下，hMSC可以分化为上皮样细胞，并很可能为角膜上 皮样细胞，hMSC有可能作为组织工程技术角膜上皮重建的种子细胞的选择。f中华腰群象意，2010， 46：719-724) 【关键词】 间质千细胞；细胞分化；角膜；上皮样细胞；组织工程 Oilhumanbone stemcellsdifferentiationinto Preliminarystudy marn咿Ⅳmesenchymul epithelial-like cells HoU C,uang一}n矗’。YENan。WUJing，XUJin—tang．sHlWen-jian。CHENYi．UUXi∞一}m， zH删G s Ze-hua．’Department巧0phll越啪lo舒，妇Peofl．tHospitalofZhulmi啦。Zhuhai519000。 519∞D．China Guangdong author：HOU Corresponding Guang-hui，Email：houguanghui502@qq．tom To thedifferentiationofhumanbonemarrow I Abstract】Objecliveinvestigate potential into to mesenchyma]stemcells(hMSC)inducingepithelial．1ikecels，evencornea]epitllelial—likeceHs。and discussthe thatinake theseedceilsusedincornealtissue hMSC plasticity hMSC engineering．Methods wereisolatedand combinedwithanattachmentculturemethodand purifiedbydensitygradienteentrifugafion in were flow