微生物标本采集、运送及管理.doc

微生物标本采集、运送及管理 来源:17时间:2007-10-08 字体:[大中小] 收藏我要投稿 　　文章出处：朱敏 转载请注明出处 血液 血液是实验室所接收的最重要的标本之一。送检血液标本有助于识别由细菌、真菌引起的菌血症、脓毒血症、心内膜炎及人工瓣膜感染、化脓性血栓性静脉炎、以及其它感染或导管引起的感染（vascular grafts）.因为大量的各种微生物与血源性感染有关，所以用于血培养的培养基应该能广泛支持各种细菌的生长。所幸的是在过去的十多年间，已经发展出许多用作血培养的改进的培养基及技术，产生出了高度可靠的手工血培养基和自动化血液培养系统。 血标本量，采血时机，及采血量 对于成人患者，每次发热时应该分别在两个部位采集血标本以帮助我们区分是病原菌还是污染菌，特别是对于凝固酶阴性的葡萄球菌、棒状杆菌、viridans链球菌、以及布鲁氏菌要考虑其污染的可能性。一般来说，单一采集的血培养标本更可能被污染，而要检出具有代表性的病原体则往往要在两个以上部位采集两份以上的血作培养。在24h内采血部位不得多于4个以上。此限制考虑到一天中每次发热时只采集2个部位的血作2份血培养就可评价2次发热。作再多的血培养都没有必要。根据几份研究资料表明，95%以上的菌血症都是在头2、3份血培养中检测出来的。 采集血标本应该在使用抗生素之前，尽管有些培养基含有消除抗生素影响的物质。理论上说，采血时机应恰好在发热高峰之前；而实际上应该是在发热高峰后立即采血。采血的总量也是影响检出病原体的重要因素之一。在一项研究中，增加血培养的血量从40ml到60ml可提高检出率10%。对于成人，每次穿刺应采血20～30ml，。对于儿童的采血量就要求少一些，因为其每毫升中的细菌要多些。血与肉汤的比例以1:5～1:10更有利于检出细菌，这或许是肉汤稀释了抑菌物质的缘故。大多数商业血培养系统为了最佳检出，都规定了必要的血标本量。对于标本量不足的血培养标本不必拒收，除非使用的是Isolator system。应定时举办讲座，向临床讲解最佳血培养技术。 初步处理 血培养标本的初步处理需要视所用的培养系统而定。送检的血培养瓶应放于室温待处理。对于一些连续监测系统，培养瓶需要用针通气或将附件插在瓶顶用于压力测定，等等。 直接法 我们不推荐血标本直接作Gram染色，因为通常血流中的细菌太少。一旦检测到有细菌生长就应该取培养瓶的肉汤或培养瓶固相琼脂的细菌作Gram染色。Gram染色报告应该详尽描述以便于选择适当的抗生素。例如，排列的Gram阳性球菌应该作出描述，i.e.,成对的，簇状的，或链状的；而Gram阴性杆菌时，有描述为细小或球杆状的。 当怀疑阳性肉汤中为金黄色葡萄球菌时，要直接作一个‘2-h凝固酶试管法实验’，以快速作出鉴定。有各种资料表明，有些商业鉴定板条能够直接用阳性肉汤接种鉴定出Gram阴性菌。 血培养系统 （略） 培养条件 所有的血培养温度都应在35。手工血培养系统应该培养7天。只有肉汤的手工需氧培养瓶要在最后一天作传代培养。对于自动化系统，培养5天就足以检出绝大多数细菌。此外，采用这样的培养时间限制，几乎没有发现污染。对于自动化的血培养不必转种作传代培养。当转种阳性瓶时，所选择的需氧培养基要根据Gram染色涂片的镜下结果。如果Gram染色镜下所见细菌形态提示可能为厌氧菌或者只从厌氧血培养瓶中检出细菌，转种时就要选择厌氧培养基及厌氧条件。 特别考虑的问题 厌氧菌 血液检出厌氧菌的机会很少。在过去几年，一些研究表明血液中厌氧菌的感染呈下降趋势。但是并非所有医院都如此。因此，实验室应该回顾自己的数据以决定是否将厌氧菌的血培养作为常规检查项目。手工血培养瓶/系统不宜用于培养厌氧菌。自动化系统的厌氧培养基足以用于厌氧菌的培养，尽管这些仪器设备的功能还不是十分完美。 苛养菌 有些可引起血液感染的细菌用常规的血培养方法不能检出。布鲁氏菌可生长在常规培养基中；然而，虽然这些菌最少可在3天检出，但是还是建议培养保持21天；而且在某些情况下最后还是需要转种作次培养。HACEK菌群（Haemophilus aphrophilis,Actinobacillus actinomycetemcomitans,Cardiobacterium hominis,Eikenella corrodens,and Kingella kingae）与细菌性心内膜炎有关，也可从常规培养基中培养出，但是需要培养至14天，并且最后需要转种培养。当临床病史提示有弗朗西斯菌感染，阳性培养瓶还需要再另外转种一份到BCYE琼脂，而且所有操作都要在3级层流生物安全柜中按安全规定进行。钩端螺旋体不能在常规培养基中检出。在钩端螺旋体感染发病的第一周采集1～２滴血，应该接种在半固体培养基，如Fletcher’s Elling