第八章染色.ppt

一、染色的目的 任何冰冻切片、石蜡切片等如果不经过染色，在显微镜下只能看到细胞及其它组织成分的轮廓，即使由于组织内部各种物质的折射指数不同，从光线的明暗上能观察到一些组织结构，但也是极其简单有限的。远不能满足观察和借以诊断的目的。  染色的目的：将染料配制成溶液，将组织切片浸入染色剂内，经过一定的时间，使组织或细胞及其他异常的成分被染上不同深浅的颜色，产生不同的折射率，便于在光学显微镜下进行观察。因此，染色在组织形态学，特别是病理形态诊断、科研和教学工作中，都具有非常重要的意义和实用价值。 二、染色的原理 染色就是染色剂和组织细胞相结合的过程。有关两者结合的原理，学说不同，尚未完全清楚，而只一般基本认为过程是化学反应和物理现象。 ㈠染色的化学反应  在组织细胞内，一般有酸性和碱性区别，酸性物质部分能与溶液中的阳离子结合，碱性物质部分能与溶液中的阴离子结合。在细胞核中，特别是核内染色质，一般有酸性物质组成（其中主要有核酸），故与碱性染料的亲和力很强，易于染色，以氧化苏木素为代表的碱性染料中有染色作用的是阳离子。在细胞浆中则由碱性物质组成，所以胞浆与酸性染料有较强的亲和力，以伊红染料为代表的酸性染料中有染色作用的是阴离子。 ㈡染色的物理作用1. 毛细作用及渗透作用 组织有许多小孔，染料由渗透作用进入组织，它与组织没有牢固的结合，所以是单纯的物理作用，不能称为直接染色作用。染色必需是染料留贮于组织内与组织有较稳固的结合。 2. 吸收或溶液作用 组织吸收染料，作牢固的结合，组织的着色与溶液颜色相同，但不是和干燥染料的颜色相同。如复红溶液为红色，所染组织也为红色，而干燥的复红带绿色。3. 吸附作用 吸附作用是固体物理的特性，它能从周围溶液中吸住一些细小的物质微粒，这些微粒可能是溶于溶液中的化合物，也可能是只在溶液中单独存在的离子，如染液中分散的色素粒子进入被染物质的间隙内，由于分子的引力作用，色素粒子被吸附而染色。 三、染色术语的概念（1）普通染色 在组织制片技术中，常规制片最广泛应用的是苏木精和伊红染色，又称为常规染色（HE染色）。（2）特殊染色 特殊染色就是为了显示特定的组织结构或其他的特殊成分，是常规染色的必要补充，也是染色技术中不可缺少的部分。它在病理诊断中起到辅助作用。 （3）单一染色 选用一种染料进行的染色，如用铁苏木素染睾丸生精细胞等。（4）复染色 用两种不同性质的染料进行染色的方法，如用苏木素和伊红分别使细胞核及胞质染成两种颜色。（5）多种染色 选用两种以上的染料的染色，如Masson三色染色法。 （6）进行性、退行性染色 进行性染色又称渐进性染色，将组织成分着色自浅至深，当达到所需要的强度时，终止染色。此种方法称为进行性染色。一般所采用的染液溶度较低，染色过程中应该不时在镜下观察进行控制，这样才能得到染色强度适中的效果。 退行性染色又称退性染色，先将组织浓染过度，使其超过所需的程度，然后再用某些溶液脱去多余的染色剂，以达到适当的深度，并使不应着色的组织、细胞的某些成分脱去色度，这个步骤称为“分化”。而最终使应该着色部分达到适宜程度。如常规HE染色中的苏木素染核与盐酸水分化过程就是退行性染色。 四、染色与分化剂 在退行性染色中，需用某些特定的溶液把附着在组织细胞上多余的染色剂脱去，从而使目的物与周围组织形成鲜明的对比，同时使目的物本身的色泽也深浅适当。这种选择地除去多余染色剂的过程，称为分化。所使用的溶液即为分化剂。分化剂分为三类 ⑴ 酸性分化剂 如盐酸、醋酸等，它们能和媒染剂（金属）相结合形成可溶性盐类，从而打开了媒染剂和组织细胞的结合，使组织细胞脱色。⑵ 氧化分化剂 如苦味酸，铬酸，重铬酸钾和过锰酸钾等，属于氧化剂。在染色中经过氧化作用后，使染色剂与组织的某种成分的结合更牢固。⑶ 媒染分化剂 媒染剂能促使组织细胞和染色剂相结合。但是将已经过染色的切片再放到媒染剂的溶液中，又可使已经和组织相结合的染色剂脱失，这就是媒染剂的另一种功能，称之为媒染分化剂。 五、染色中的注意事项⑴ 较多的组织切片染色，是经过固定、脱水、透明、包埋、切片、脱蜡等步骤以后，再进行染色；有的是直接冰冻切片后即可染色，这些都是根据不同的目的要求而进行的染色。 ⑵ 染色准备工作和染色实验室的设置，都是做好染色工作的必要条件。各种器皿的清洗要严格，按染色方法中的细节去做。染色试剂的配制时间长短和存放，一定要按化学性质与组织的着色能力进行正确掌握使用。实验室常规设置要合理，有条件时，可应有通风设备。实验台和实验柜，各种器皿和染色所需物品必须齐全，具有一定的条理性，是开展染色工作和提高质量的必要条件。 ⑶ 在染色过程中，即要