胡萝卜与黄芪细胞融合技术的研究.pdfVIP

摘 要 摘 要 黄芪[Astragalus 其干燥根为常用滋补中药材，含有活性较强的三萜皂苷、黄酮类、多糖类、氨基酸、微 量元素以及棕榈酸、羽扇豆醇等。但由于草原荒漠化以及乱采挖等原因，药用野生黄芪 资源已十分贫乏，即使采用人工栽培的方法不仅产量不能满足市场需求，而且品质也得 不到保证。胡萝卜是植物组织培养中经典实验材料之一，也是近年来进行遗传操作的主 要材料。以胡萝卜原生质体为受体，进行外源基因导入的研究，首先要建立一套稳定、 高效的原生质培养系统。因此，用细胞融合等现代生物技术将中药黄芪的药用成分基因 转入胡萝卜中，为提高种质资源生物量、优化品质具有重要意义。 1．建立了由黄芪叶片诱导愈伤组织的技术体系。愈伤组织的诱导效果受培养基、植 物生长调节激素种类、浓度以及配比等因素的影响。将叶片接种在Ms的诱导培养基上， ▲ 获得愈伤组织；然后在添加2，4-D的MS增殖培养基上获得增殖培养。 t二． 2．以黄芪叶片和愈伤组织为材料，对黄芪原生质体的制备分离技术进行了研究。结 ▲ 果表明：采用黄芪叶片制备原生质体远远优于黄芪愈伤组织，能够获得高产量高活力的 40rpm)恒温摇床上水解12小时就能达到较好的分离效果，获得高质量的黄芪原生质体， 并且黄芪原生质体纯化时以800rpm离心6～8分钟效果较好。 生质体融合，从PEG不同浓度、不同处理时间以及不同原生质体密度对原生质体融合的 影响等方面优化了融合条件。6一8d观察到第一次细胞分裂，25～30d形成多细胞团， 继续培养获得愈伤组织。 龟 4．进行电融合时最适宜的电场参数为：交流电场强度40V／am、直流脉冲场强 700V／cm、脉冲宽度40ps，在此参数下的电场处理不影响原生质体的活力。 、 关键词：胡萝l、，黄芪，愈伤组织，悬浮细胞，原生质体，细胞融合，组织培养 Abstract ^ the roots is vivaciousofFabaceae．His Astragalusmembranaceus(Fisch．)Bungeplant aretheusualnutritiousmedicinal containactive material，which acidand polysaccharide、aminoacid、microelement、palmiclupe01．Becauseofplaindeserting andexcessive resourceof is however,the cutting Astragalus ourselvesnot callnotmeettheneedsof also verynecessitous．Culturingby only market，but cannot the carotavat．salivusHoffm．isoneofthe certifyq