芽孢杆菌PCR鉴定方法的建立和应用.pdfVIP

具有良好的应用价值。 5．通过产品特征的分析和研究，建立了产品洗涤、菌体悬浮、珠式破碎、酚．氯仿．异丙醇抽 提的微生物肥料产品DNA提取方法，解决了微生物肥料中腐植质含量高难去除和芽孢难破壁的 体样品的PCR灵敏性达到10-i05 CFU／mL，固体草炭样品灵敏度达到107 CFU／0．29。虽然该方法 DNA损失较多，敏感性稍差，但是成本低，效率高，可直接用于PCR，为PCR方法直接检测产 品提供了前提条件。 个产品中一种目标微生物含量太低(低于检测限)无扩增产物外，其他产品均有目标菌的扩增产 物，根据扩增条带的大小对产品的鉴定与传统分离培养及生化鉴定结果一致，而且PCR反应的特 异性没有受到产品中其他微生物的干扰。实验结果表明本文建立的种(群)特异PCR技术和DNA 提取方法可用于微生物肥料产品的直接检测，在提高微生物肥料的检测水平和检测效率方面有着 巨大的应用潜力。 通过大量参考菌株和生产菌株以及微生物肥料产品的试验表明：基于序列分析和种(群)特 异引物的基础上建立的单重PCR和复合PCR方法，在鉴定和鉴别7个种(群)的芽孢杆菌菌株 上具有快速、准确、敏感的优点，该方法不仅能够用于纯菌株的鉴定和鉴别，在含有复杂微生物 群体和基质的微生物肥料产品中也具有良好的应用前景。 关键词：特异PCR，菌种鉴定，检测，芽孢杆菌，微生物肥料 Ⅱ Abstract bacteria inthe The used Microbial accI：trate endospore-forminga∞usually Fertilizers．酬and these be identificationof bacte．riawouldusefulto time fortheog％$1nelltof improverequired quality MF aim to andaccmam and of ofthis was the safay producm．The study developprim∞forrapid identificationofBacillus have in and spe=ci％whichhighsimilaritymorphologicalphenotypic characteristicsandbuildaaerialofPCRmethodstodetectthe productsOf～伍directly． and16S sequenceoftheBacillusspcci∞rpoA，gyrA，sroOa Byanalysisoftheuniquenueleotide rRNA of Or Wg目tg forBacillus pairsspecies-specificgroup喵pecitic developed genes，Sevail pfimen and and B．subtilis