刺激隐核虫幼虫诱导的斜带石斑鱼体液免疫应答.docVIP

摘 要 刺激隐核虫是一种纤毛类寄生虫，对水产养殖和观赏鱼类造成了极大危害，在短时间就会引发严重感染和高死亡率，对经济生产造成了很大的损失。本文就刺激隐核虫的幼虫阶段所引起的体液免疫应答过程进行研究，以期能找到具有最高免疫原性和免疫保护性的免疫原，为以后疫苗的研制与开发奠定基础。刺激隐核虫的生活周期的四个阶段，我们采用的是Colorni和Burgess(1997)的术语：滋养体(trophont)、胞囊前体(protomont)、胞囊(tomont)和幼虫(theront)。腹腔注射刺激隐核虫幼虫能使斜带石斑鱼的血清和皮肤培养液产生阻动隐核虫幼虫的特异性抗体，并能使免疫鱼获得的免疫保护，在本实验中，相同的免疫方法所引发的血清抗体和皮肤抗体的变化规律存在很大的差别，两类抗体的最初生成时间、达到峰值的时间以及阻动效价等都不一致，这说明鱼类的系统免疫应答和皮肤粘膜免疫应答是相互独立的。刺激隐核虫1 前言 1 1.1 关于刺激隐核虫的研究 1 1.2 关于斜带石斑鱼的研究 2 1.3 刺激隐核虫各生活阶段的研究 2 1.4 本实验的目的与意义 3 2 材料和方法 3 2.1 实验鱼的来源、检测及驯养 3 2.2 刺激隐核虫幼虫的来源 4 2.3 实验分组 5 2.4 免疫方法 5 2.5 抗血清的制备方法 5 2.6 皮肤培养液的制备方法 5 2.7 血清抗体和皮肤培养液阻动效价的测定 6 2.8 幼虫对实验鱼致死剂量的测定 6 2.9 攻毒 6 2.10 数据统计方法 6 3 结果 6 3.1 抗体对幼虫的阻动过程 6 3.2 抗血清阻动效价的变化规律 9 3.2 皮肤培养液阻动效价的变化规律 10 3.3 抗血清和皮肤培养液阻动效价的变化差异 11 3.4 致死剂量幼虫攻毒后各实验组鱼的死亡率 11 4 讨论 12 1 前言 1.1 关于刺激隐核虫的研究 刺激隐核虫是一种纤毛类寄生虫，对水产养殖和观赏鱼类造成了极大危害，在短时间内就会引发严重感染和高死亡率，对经济生产造成了很大的损失。刺激隐核虫的危害随着海水养殖业的发展，其危害性也日益增大。特别是近年来海水养殖业发展迅猛，养殖规模迅速扩大，海水观赏鱼类的养殖也越来越多，这些高密度养殖的海水鱼为刺激隐核虫的传播和该病的爆发提供了良好的条件。迄今为止，报道刺激隐核虫病的地区包括印度太平地区、波斯湾、以色列的红海、大西洋和加勒比海地区(Colorni and Burgess, 1997; Yambot et al.,2003)。Diggles和Adlard (1997)的研究表明刺激隐核虫存在种内变异, 而且一些虫株有可能发生进化。Yambot等人(2003)在海鲷(Sparus sarba)上发现了一株生活在低盐度海水里的刺激隐核虫变株，引起很高的死亡率。这一发现扩大了该寄生虫的栖息地和宿主范围。而且，该种寄生虫在海水中具有广泛的宿主范围。Wilkie(1969)年曾报道了刺激隐核虫感染96种水族馆养殖的海水鱼。Diggles(1996)调查了澳大利亚的14种野生海水鱼，在13种鱼体上发现了刺激隐核虫(Diggles and Lester，1996a)。罗等人对中国华南地区六个科的十种海水养殖鱼类的调查发现，十种海水鱼类都被刺激隐核虫感染。所有这些研究结果表明，刺激隐核虫具有广泛的宿主范围。 Burgess(1995)曾报道过感染过刺激隐核虫的鲻鱼引起其获得性免疫，并保护其免受该虫的再次感染。Yoshinaga(1997)发现免疫过的鳉鱼能得到很好的保护，并且其血清能阻动刺激隐核虫的幼虫。近几年来，关于鱼类对对刺激隐核虫的免疫应答引起了研究者的重视，刺激隐核虫幼虫免疫的石斑鱼血清和粘液中都发现了特异性抗体，并具有很好的免疫保护性(Yoshinaga and Nakazoe, 1997; Luo et al., 2007; Yambot and Song, 2006)。目前采用的物理或化学的方法对该病很难取得好的疗效(Hirazawa et al., 2001a; Hirazawa et al., 2001b; Hirazawa et al., 2003; Kakuta and Kurokura, 1995; Yoshinaga, 2001)，淡水浸泡对海水鱼的伤害较大，而且费时费力。化学治疗也受到很多方面的限制，许多化学药品是致癌物质，这就不能用于食用鱼的治疗。而且，化学药品要经过很多处理才能达到使用效果，否则只会对自由生活的时期有作用，而对于寄生于宿主的阶段就不会有作用。因此，在感染后治疗过程中，相对于化学治疗来说，免疫接种的方法是一种更为安全和有效的措施。 本文中采用的实验鱼是斜带石斑鱼，石斑鱼( Epinephelus )属鲈形目(Perciformes)、鲈亚目(Pe