浙科版选修1学案.doc

选修1 《生物技术实践》 实验1 大肠杆菌的培养和分离 1、细菌: 细菌是单细胞的原核生物，有细胞壁（肽聚糖）、细胞膜、细胞质，无成型的细胞核。有一大型环状DNA分子（拟核）和多个小型环状DNA(质粒)，以分裂（二分裂）的方式繁殖。 大肠杆菌是: 革兰氏阴性、兼性厌氧的肠道杆菌，代谢类型 过 程 分离的标准 特 点 划线分离法 接种环灼烧灭菌 - 划线分离接种 --倒置培养—分离出单菌落 划线末端出现不 连续的单个菌落 方法简单 涂布分离法 稀释菌液 -- 滴加菌液(0.1ml)--涂布分离接种---倒置培养--分离出单菌落 培养皿中有20 个以内的单菌落 操作复杂，单菌落更易分离 (3) 固体培养基进行恒温培养时，要将培养皿倒置: 防止培养皿盖上的水滴，落入培养基的表面并且扩散，菌落中的细菌也会随水扩散，菌落达不到分离的目的。 5. 大肠杆菌的培养和分离 实验材料: LB液体培养基配制、调节PH，LB固体培养基（LB液体培养基+琼脂）配制、调节PH，大肠杆菌菌种斜面、空白斜面(用于保存菌种) 实验步骤: ① LB培养基的灭菌: LB液体培养基、LB固体培养基高压蒸气锅灭菌1kg [121 0C]有压力后开始计时灭菌15min。 ② LB固体培养基：灭菌的培养基60 0C时，在超净台的酒精灯火焰旁，倒入培养皿，制平板。 ③菌种扩大培养:把试管中固体斜面菌种接种到LB液体培养基中，370C摇床上振荡培养12h。 ④划线分离: 用接种环醮扩大培养的菌液一次，多次划线分离，37 0C倒置培养12--24h后， 观察分离的单菌落。 ⑤存留菌种:把分离的单菌落划线接种到试管空白斜面，37 0C培养24h后，4 0C存留菌种。 实验2 分离以尿素为氮源的微生物 一．实验原理: (1)脲（即尿素）是人和哺乳动物体内蛋白质降解的产物，农作物不能直接吸收利用，土壤中有的细菌含脲酶: (NH 2)2 C=O + H2O 脲酶 2NH3 + CO2 (2 )比较：选择培养基（尿素为唯一氮源）和LB全营养培养基(作对照) 的菌落数。 二、实验目的: 利用尿素为唯一氮源的选择（固体)培养基来分离土壤中含脲酶的微生物，并了解它在生态平衡中的作用。 三、实验步骤： 1、制固体培养基: （1）LB全营养培养基: 配置--灭菌--倒平板 （2）尿素固体培养基(选择性): 配制（葡萄糖 + NaCl + K2HPO4 + 琼脂糖 + 酚红）→灭菌→ 60 0C时，用G6玻璃漏斗过虑加尿素溶液 【酚红:遇酸黄色、遇碱(NH3)红色】 2、制备细菌悬液: （哺乳动物排泄物处)土样 + 无菌水→取悬液稀释10-4、10-5 。 3、涂布分离法分离细菌。取10-4、10-5 稀释液各0.1ml，分别加到有LB固体培养基和尿素培养基的培养皿各三个，用玻璃刮刀在灯焰旁涂布到整个平面。 4、倒置培养。37 0C恒温箱培养24-48 h,观察分离的单菌落数。 5、观察结果: 全培养液中单菌落数多，尿素为氮源的培养基平板中单菌落很少。 【实验过程归纳】 培养基配制、灭菌和倒平板→土壤取样→样品的稀释→涂布分离微生物→菌落的培养与观察。 实验4 果汁中的果胶和果胶酶 一、酶是生物体中生化反应的催化剂。催化反应是在常温常压下进行，而且快速、专一。 二、果胶是植物细胞壁的主要成分之一 (1)组成：由半乳糖醛酸和半乳糖醛酸甲酯聚合而成高分子化合物。山楂果实中果胶含量较多。 (2)功能: 果胶使植物细胞粘合在一起，并可结合大量的水分。去掉果胶会使植物组织变得松散，有利用于果汁的形成，可提高出汁率和果汁变澄清。 (3) 特性: 果胶不溶于乙醇，这是鉴别果胶的一种简易方法。 三、实验原理: (1) 果胶酶和果胶甲酯酶可水解果胶生成半乳糖醛酸，使植物组织变的松散，有利于果汁的形成，提高果汁的出汁率并使果汁澄清。果胶不溶于酒精，是鉴别果胶的一种简易方法。 (2) 可根据产生的果汁量及果汁的澄清度、果汁中果胶的剩余量来表示这两种酶的活性大小。果胶酶和果胶甲酯酶的活性受温度、PH等环境因素的影响。 某些真菌细胞（如黑曲霉、苹果青霉等）可生产并分泌果胶酶。 四、实验目的: 1、探究果胶酶在果汁制作中的作用 2、检测果胶酶的活性的影响因素（温度） 五、实验步骤: 【问题】果胶酶在制作果汁中起什么作用？ 果胶是细胞间的黏连成分，也是果汁中的成分， 加入果胶酶可将细胞离析，增加固形物的分散度。此外还降低了水果匀浆悬液的黏度，有利于过滤掉不溶物，并使果胶分解成半乳糖醛酸。 实验6