总黄酮、多酚含量的测定.docVIP

燕麦总黄酮含量的测定 一、仪器 紫外-可见分光光度计、分析天平、低速离心机、超声波提取器、恒温水浴锅、粉碎机、pH计、10mL容量瓶15个、10mL具塞试管、100mL烧瓶、10mL离心管10个、试管架2个 二、药品 芦丁标准品40mg、无水乙醇1000mL、亚硝酸钠500g、硝酸铝500g、NaOH 500g 三、实验步骤 （一）、样品处理及总黄酮的提取 1. 将样品籽粒分别称取2.5 g置于小信封里，80℃烘干24 h。 2. 研成粉末，称取500±2 mg样品于10 mL离心管中，使样品位于试管底部（重复3次）。 3. 每管加4 mL 60％乙醇，放水浴锅60℃浸提2 h。 6000 r/min离心10 min，离心后取上清液于10 mL容量瓶中。 4. 再向离心管中加4 mL的60％乙醇，放水浴锅60℃浸提1 h。6000 r/min离心10 min，离心后取上清液于相应的10 mL容量瓶中。60％乙醇定容至10 mL，待测。 （二）、标准曲线绘制 1. 精确量取浓度200 μg/mL芦丁标准溶液0、0.2、0.4、0.8、1.2、1.6、2.0 mL分别置于10 mL容量瓶中。 2. 向容量瓶中分别加60％乙醇5、4.8、4.6、4.2、3.8、3.4、3.0 mL。 3. 然后加5％亚硝酸钠0.3 mL，摇匀，静置6 min。 4. 再加10％硝酸铝0.3 mL，摇匀，静置6 min。 5. 加4％氢氧化钠4.0 mL，用60%的乙醇定容至刻度，摇匀，静置12 min。 6. 于510 nm波长下测定吸光度，并以芦丁标准浓度值为纵坐标，以吸光度为横坐标，绘制标准曲线。 （三）、样品提取液总黄酮含量的测定 准确吸取总黄酮提取液2.0 mL于10 mL容量瓶中，按二的方法测定吸光度，将吸光度代入标准曲线计算样液的总黄酮含量。 燕麦总酚含量的测定 一、仪器 紫外-可见分光光度计、分析天平、低速离心机、恒温水浴锅、粉碎机、pH计、微波炉、回流装置、25mL容量瓶、25mL具塞试管、250mL烧瓶 二、药品 没食子酸标准品100mg、无水乙醇1000mL、无水碳酸钠500g、盐酸500mL、福林酚试剂100 mL 三、实验步骤 （一）、样品总酚的提取 称取2.0g粉碎的燕麦粉于250 mL烧瓶中，加入40 mL体积分数60%的乙醇溶液，提取液中盐酸含量0.024%，搅拌均匀，在恒温水浴锅中安置好回流装置，水浴温度75℃，提取50 min。提取液以3000 r/min离心20 min，取上清液，量取提取液体积，采用福林酚法测定燕麦提取液的总多酚浓度。 （二）、标准曲线绘制和样品总酚含量的测定 精确称量没食子酸标准品25 mg，用水溶解后定容于250 mL容量瓶中，得到0.1 mg/mL的标准贮备溶液。分别移取没食子酸标准储备溶液0.00、0.25、0.50、0.75、1.00、1.25、1.50 mL置于25 mL具塞试管中，分别加入福林酚试剂1 mL，摇匀后再分别加入质量分数12% Na2CO3溶液2 mL，用水定容至25 mL，摇匀。平行三组。室温下避光反应2 h后，在765 nm波长下测定吸光度。以没食子酸标准溶液的浓度为横坐标，以吸光度为纵坐标，制作标准曲线。 吸取1.00 mL燕麦总多酚提取液于25 mL具塞试管中，分别加入福林酚试剂1 mL及质量分数为12%的碳酸钠溶液2 mL并定容至刻度，在室温下避光反应2 h，在765 nm波长处测定样品的吸光度，并根据工作曲线来计算提取液中的燕麦总多酚含量。