13号染色体缺失与多发性骨髓瘤预后相关性的研究.pdf

一 1722 一 ChinJLabDiagn，September，2012，Vol16，No．9 文章编号 ：1007—4287(2012)09—1722—03 13号染色体缺失与多发性骨髓瘤预后相关性的研究 徐洪伟 ，贺 飞 (哈尔滨医科大学附属第二医院检验科 ，黑龙江 哈尔滨 150086) 多发性骨髓瘤 (multiplemyeloma，MM)是 以浆 细胞计数 ，以1×10一2×10 ／ml的密度注入 10ml 细胞异常增生为特征的一种恶性肿瘤疾病 ，占血液 培养液 ，加有丝分裂原刺激剂 PHA72小时，于终止 系统肿瘤的 1O 、全身恶性肿瘤 的 1 口]。好发于 培养前 2—4小时加入秋水仙素终止 中期分裂相后 中老年人 ，近年来 由于我 国人 口老龄化及人们对该 常规染色体标本制备。制备的染色体标本保存于一 病的认识水平提高 ，该病发病率有逐渐增加趋势。 2o℃，采用气干法滴片 ，Giemsa液染色，在显微镜下 染色体异常是 MM 预后 的重要指标，而常规染色体 观察 50个中期分裂相 ，核型描述依据 《人类细胞遗 G显带技术操作繁琐 ，周期长 ，干扰 因素多 准确性 传学国际命名体制(ISCN1995)》。 和特异性欠佳，只有约 3 的患者检测结果为 阳性 ， 1．2．5 间期荧光原位杂交 (interphasefluorescence 对治疗反应 的判断及微小残 留病灶 的检测较为 困 insituhybridization，I—FISH)探针 检测探针 为针 难 。随着 荧光 原位杂 交技 术 (fluorescenceinsitu 对 13q14缺失的探针 (D13S319)，购 自基因有限公 hybridization，FISH)、比较基 因组杂交 (compara- 司。(1)玻片制备 ：骨髓细胞悬液气干法滴片 ，在室 tivegenomichybridization，CGH)、光谱核型分析 温下过夜老化；将玻片在 37℃新鲜配制的 RNaseA (spectralkaryotyping，SKY)等细胞遗传学和分子 溶液 中孵育 30min，室温放置 30rain；室温下于 2 生物学技术的发展，MM 细胞遗传学研究领域有较 ×SSC(pH7．0)溶液中漂洗玻片 2次 ，依次置于室 大进展 。本 研究采用 I—FISH 技术 ，应用 D13S319 温的 70 、85 和 100 乙醇中梯度脱水 ，自然干燥 特异性探针 ，探讨 MM 患者 的细胞遗传学异常与临 玻片。(2)变性杂交：玻片在 74℃ 变性液 (70 甲酰 床特征的关系。 胺 ／2×SSC)中变性 5min后在乙醇中梯度脱水 ，自 1 材料和方法 然干燥 ；置于 46℃烤片机上等待杂交；将 1O l探针 1．1 标本收集 2005—2009年我 院确 MM 诊病 混合物 (按照探针 ：去离子水 ：杂交缓冲液为 2：1 例 64例 ，男 44例 ，女 2O例，年龄 34—85岁 ，中位年 ：7的比例混合)于 74℃水浴 中变性 5min，46℃水 龄 62岁 ；符合 国内MM 的诊断标准 ]，确诊前均未 浴 10—15rain后滴于玻片杂交 区域 ，立即加盖盖玻 接受过化疗和其他特殊治疗。I—FISH对 照组选用 片 ，用橡皮胶封边 ；将玻片置于预热的湿盒 中，42℃ 同期 10例非血液系统恶性疾病核型正常患者。 温箱中过夜杂交。(3)玻片洗涤 ：移去盖玻片 ，置于 1．2 实验方法 65℃ 0．4×ssc／0．3 NP-40洗涤液 中洗涤 2 1．2．1 免疫固定电泳采用美国Helena公司全 自动 rain，在室温 0．1 NP-40／2×SSC洗液洗涤 1min， 快速电泳分析系统 (Ra