玉米品种鉴定-实验室质量管理.docVIP

学习心得 一、实验室质量管理 1、质量法规 对《产品质量法》、《标准化法》、《种子法》、《农作物种子标签和使用说明管理办法》等的学习有待进一步学习。 2、质量与检验 （1）从过程管理的角度来看，质量绝对不是检验出来的，预防产生质量，检验不能产生质量； （2）合格产品不是检验出来的，而是干出来的； （3）检验可以发现不合格产品。 3、种子检验室质量管理 应建立相适应的有效的管理体系，形成文件，将抽样到结果报告各环节检验活动标准化、制度化。管理体系文件一般包括四个层次：《质量手册》、《程序文件》、《作业指导书》、《记录格式》。 4、试验要求 （1）若发现试验结果异常，试验人员不要轻易下结论，应认真查记录、查计算、查操作、查试剂、查方法、查样品，找出原因后有针对性地进行复验。 （2）要认真及时做好原始记录，要求所有的实验内容都要有原始记录，不得漏记。 5、记录控制要求 （1）试验数据应用中性笔或钢笔在实验同时记录在原始记载表上，不应事后抄录，也不应漏记。试验中出现的异常情况也应及时记录。书写要求工整、清楚、真实、准确、完整。不准用铅笔记录，不得随意涂改、乱写、乱画和折叠。当发生笔误时，用“－”注销，并在“－”上方由本人更正，加盖改正章。 （2）试验原始记录要按年编目成册，做好标识，归档保管。（每年做一次整理归档）。 6、检测数据修约规则 （1）称重规定：1g以下保留四位小数，1～10g保留三位小数，10～100g保留二位小数，100～1 000g保留一位小数。 （2）在净度分析中，各成分之和是99．9％或100．1％，从最大值(通常是净种子成分)增减0．1％。 （3）数字修约规则：“四舍六入五成双”法则。 （4）检测室报出数值最右的非零数字为5时，应在数值后面加“( + )”或“( -)”或不加符号，以分别表明已进行过舍进或未舍未进。 7、发芽用沙： 0.05-0.08mm;160度烘干2小时杀菌。水：PH：6.0-7.0（必须验证） 二、玉米品种鉴定技术-SSR标记法 不同点: 1、提取DNA用96孔深孔板；PCR板。 2、将深孔板放入沸水中煮沸15min；PCR煮沸； 3、将煮好的深孔板拿出，加入250μl的TE，静置至室温即可，TE加入的量应与NaOH提取液加入的量等体积；120μl的纯净水。 4、DNA提取方法有CTAB提取法、快速碱煮提取法、试剂盒法；PCR碱煮提取法。 5、电泳检测有PAGE电泳检测、毛细管电泳检测两种；PAGE电泳检测。 6、在干净的凹板上涂上疏水硅烷；剥离硅烷。 7、将扩增好的产物加入5μl变性剂变性；加样缓冲液。 8、累计检测40个核心SSR引物位点；20个。 （二）重点知识点 1、SSR技术特点 ?多态性丰富，分辨能力强，每个位点最多可含有十多个等位基因； ?较高重复性，针对于每个位点设计特异性引物，扩增均为特异性目的片段扩增； ?前期研发基础强，有大量已知染色体位置的共享位点； ?为共显性标记，能准确区分不同等位变异； ?为中性变异标记； ?数据形式为具体片段长度，能够实现数据标准化； ?技术非常成熟，检测方法简便易行； ?SSR技术易于推广，不受专利限制。 2、DNA提取的原则 （1）保证DNA结构的完整性； （2）将蛋白质、多糖、多酚等杂质降低到最低程度； （3）排除有机溶剂和金属离子的污染； （4）纯化后不应存在对酶有抑制作用的物质； （5）排除其他核酸分子的污染。 3、快速碱煮法 （1）碱：在碱性环境下裂解细胞，使DNA变性，从而达到提取的目的。碱能够使DNA变性，且不会复性，并缠结成网状物质析出最终加入TE溶液溶解。 （2）煮：煮沸的方式能够代替液氮冷冻法，抑制DNA酶的活性，防止煮沸还能够代替研磨，破坏细胞壁和细胞膜，释放出DNA。 4、核酸提取注意事项 ?最好使用新鲜材料，低温保存的样品材料不要反复冻融 ?材料应适量，过多会影响裂解，导致DNA量少，纯度低 DNA提取量少 （1）主要原因 实验材料不佳或量少；破壁或裂解不充分；沉淀不完全；洗涤时DNA丢失 （2）解决方法 尽量选用新鲜（幼嫩）的组织；样品预处理充分；适当延长高温裂解时间；用枪头将洗涤液吸出，勿倾倒；低温沉淀，延长沉淀时间，加沉淀辅助物 PCR扩增 （1）PCR，是指在DNA聚合酶催化下，以母链DNA为模板，以特定引物为延伸起点，通过变性、退火、延伸等步骤，体外复制出与母链模板DNA互补的子链DNA的过程。是一项DNA体外合成放大技术，能快速特异地在体外扩增任何目的DNA。 （2）一是被扩增的DNA所需量极小，理论上讲一个分子就可以用于扩增了；二是扩增效率高，几个小时就扩增1000万倍以上。 7、PCR反应体系及循环条件 PCR反应是Taq酶以dNTP为原料，以一对寡核苷酸引物为