睡眠剥夺对小白鼠免疫能力的影响.docVIP

睡眠剥夺对小白鼠免疫能力的影响 主讲人：辛凯悦 指导老师：朱艳媚 班级:11级临床2班 组员：杜晨阳、辛凯悦、朱灵凤、舒文静、李毅 一．研究目的 睡眠是一种生理现象，睡眠充足与否与人体健康有着密切联系。长期睡眠剥夺可引起人或动物产生不良情绪反应、免疫功能下降等等。随着生活节奏的加快，越来越多的儿童与成年面临睡眠不足的危害，这已足够引起人们的注意。本小组通过一种慢性不完全剥夺小鼠睡眠实验来观察睡眠不足对小鼠免疫功能的影响。 二．研究对象 一组：健康雄性小鼠20只，体重22±2g,随机分成a组、b组，即正常对照组和慢性不完全睡眠剥夺组。 二组：健康雄性小鼠20只，体重22±2g,随机分成c组、d组，即正常对照组和慢性不完全睡眠剥夺组。 三组：健康雄性小鼠20只，体重22±2g,随机分成e组、f组，即正常对照组和慢性不完全睡眠剥夺组。 三．实验方法 （一）动物模型的建立 采用轻触法一、二组对小鼠不完全剥夺睡眠，每天剥夺睡眠时间从上午六点到下午五点结束。其中a组、c组是实验组，b组、d组是对照组。具体方法为：当实验组小鼠出现睡眠状姿势时，即用毛笔轻触小鼠使其保持清醒状态，当小鼠处于清醒状态时则不对其进行任何刺激，在睡眠剥夺过程中，正常对照组始终可以自由睡眠。一个周睡眠剥夺后，进行免疫功能的测定。 （二）免疫功能的测定 1.胸腺指数和脾脏指数的测定 器材：滤纸，粗剪刀，婴儿称 对象：第一组实验小鼠 实验步骤： （1）用颈椎脱臼法处死第一组小鼠并立即称取体液 （2）解剖摘取小鼠的胸腺和脾脏，用滤纸吸干残血后，称重（mg）分别除以小鼠体重(g)，，得到胸腺指数和脾脏指数。??? 　　　胸腺指数=（胸腺重量/小鼠体重）×10　　　??? 脾脏指数=（脾脏重量/小鼠体重）×10 脾脏96孔“U”形或“V”形微量反应板，50 uL定量移液器，滴头，微型振荡器。0.5%红细胞制备方法 　　先用灭菌注射器吸取3.8% 枸橼酸钠溶液(其量为所需血量的1/5)，从采血至需要血量，置灭菌离心管内，加灭菌生理盐水为抗凝血的2倍，以2000r/min离心10min，弃上清液，再加生理盐水悬浮血球，同上法离心沉淀，如此将红细胞洗涤三次，最后根据所需用量，用灭菌生理盐水配成0.5%红细胞悬液。 96孔微量反应板的清洗 将浸泡有75%乙醇的棉签放入微量反应板的每个孔内旋转，用自来水冲洗反应板5次，再用蒸馏水冲洗3次以上，置37℃温箱中干燥。脾脏[1]洪军,马文龙.睡眠剥夺的对策[J].第一军医大学学报,2001,21(2):152—154 [2]何志恒,印大中.睡眠研究的科学前沿[J].生命科学研究,2002,6(4):184—187 [3]李洋,谢扬丽,胡志安.感染和免疫反应对睡眠的影响[J].生理科学进展,2007,38(2):187——190 [4]赵忠新.临床睡眠障碍学[M].上海：第二军医大学出版社,2003:25—45 [5]丁琳,胡晓波.睡眠剥夺对机体的影响[期刊论文].微量元素与健康研究,2010(6) - 6 -