4流式细胞术在免疫学的应用.ppt

四、T淋巴细胞及其亚群免疫标记 与人体免疫功能有关的主要是淋巴细胞，具有细胞免疫功能主要是淋巴细胞中的T细胞亚群，而B细胞与体液免疫功能有关 四、T淋巴细胞及其亚群免疫标记 T细胞亚群的功能: T细胞亚群在适应性免疫应答中起着关键作用，T细胞亚群的变化直接影响机体的免疫状态的强弱和结局，对于适应性免疫反应功能在时间、空间层面上的质与量的评价，可以通过T细胞亚群分布和功能检测来实现 四、T淋巴细胞及其亚群免疫标记 T细胞亚群的功能: 目前越来越多的研究表明，T淋巴细胞亚群在各种临床疾病(如：造血系统疾病，病毒感染和恶性肿瘤等)都有异常改变。 在各种疾病的发生发展过程中测定人外周血中T抑制(T8)和T辅助(T4)淋巴细胞亚群比例，可用来评价体内细胞免疫调节平衡状态 四、T淋巴细胞及其亚群免疫标记 T细胞亚群的功能: 测定T亚群的相对标记率，特别是T细胞的免疫调节功能，可以帮助研究各种与免疫有关的疾病发病机制。所以，它可以作为临床免疫研究的手段，成为临床检验的一项重要指标 四、T淋巴细胞及其亚群免疫标记 T细胞的功能及检测参数： 抗原识别：主要通过检测T细胞受体(简称为TCR)与其相应的配体(MHC-主要组织相容性复合物) 2 T细胞活化：活化早期可以检测活化的表型物质CD25、CD71、CD69或MHC-Ⅱ分子和细胞因子IFN-γ、TNF-2等。也可检测细胞内钙离子升高和酪氨酸磷酸化酶等 四、T淋巴细胞及其亚群免疫标记 T细胞的功能及检测参数： T细胞增殖：DNA细胞周期和Brdu掺入法，或者分析细胞周期相关蛋白等(如Cyclin-D1、D2、D3、E） 4 T细胞克隆扩增：可以检测T细胞受体V基因片断产物，应用其相应单克隆抗体，定量分析基因片断的取用频率，这是一项检测T细胞克隆的新技术 四、T淋巴细胞及其亚群免疫标记 T细胞的功能及检测参数： T细胞分化：Th (Th1 Th2)， Ts (Tsc/ Ts)可以用细胞内细胞因子以及体液或培养液中的细胞因子，应用微球夹心免疫荧光法，这是近年来发展的一项新技术 四、T淋巴细胞及其亚群免疫标记 T细胞的功能及检测参数： 6 T细胞的效应作用：可以检测Fas、 FasL、颗粒酶或可检测细胞内凋亡指数Annexin-V(磷酸酯丝氨酸酶)等，也可检测Caspase酶(凋亡酶系统) T细胞免疫记忆功能：常用 CD45亚型(CD45RO) 四、T淋巴细胞及其亚群免疫标记 T细胞的免疫表型： 根据T淋巴细胞免疫表型和功能分为 ①T总淋巴细胞 CD3+ ②T辅助性细胞 CD4+/CD3+ ③T抑制性细胞 CD8+/CD3+ ④NK细胞 CD56+/CD3+ 四、T淋巴细胞及其亚群免疫标记 四、T淋巴细胞及其亚群免疫标记 四、T淋巴细胞及其亚群免疫标记 四、T淋巴细胞及其亚群免疫标记 FCM检测T细胞亚群的参考值： 0.98 －1.94 CD4/CD8 10.4 % －19.8 % CD56 18.4 % －31.2 % CD8 35.4 % －52.0 % CD4 61.1%－77.0 % CD3 正常人参考范围 细胞表面抗原 四、T淋巴细胞及其亚群免疫标记 T细胞亚群的生物学意义： 1 T3+升高、T4+升高提示免疫功能增强，在这里并不单指细胞数量增加，还应该将T3+、 T4+表达量(荧光量)增加也视为免疫功能增强 四、T淋巴细胞及其亚群免疫标记 T细胞亚群的生物学意义： 2 T8+升高提示免疫功能降低，但是T抑制细胞中有一群T毒性细胞，当T毒性细胞增高时常产生自体及异体细胞破坏功能增强，那将造成自身免疫性疾病的发生，在器官移植术后产生对异体器官的排异反应 四、T淋巴细胞及其亚群免疫标记 T细胞亚群的生物学意义： 3 NK细胞表达阳性增加，表达自然杀伤功能增强和执行免疫监视功能增强 四、T淋巴细胞及其亚群免疫标记 T细胞亚群的生物学意义： T4/T8比值升高提示免疫功能增强，但常与一些自身免疫性疾病有关(如类风湿、塞莱斯氏综合症) T4/T8比值降低提示免疫功能降低，如在恶性肿瘤、病毒感染、再障性贫血等，尤其在AIDS病时具有特异性极高的诊断价值 四、T淋巴细胞及其亚群免疫标记 T细胞亚群流式免疫标记程序： 在进行淋巴细胞亚群标记时，目前人们常利用全血进行标记，在加入抗体后加入lysing红细胞溶解液，3-5min后，加入PBS洗去血红蛋白，并重新悬浮于lml PBS中，上机检测，该方法的优点是，用血量少，一般每种抗体用全血20ul即可，且操作步骤简便 四、T淋巴细胞及其亚群免疫标记 T细胞亚群流式免疫标记程序： Lysing溶解液的配制: 0.83%氯化胺，0