微生态制剂对后备母猪 免疫应答及抗猪圆环病毒和蓝耳病.doc

微生态制剂--清温猪肽对后备母猪 免疫应答及抗猪圆环病毒和蓝耳病毒影响的初步观察 摘要目的：为探索控制动物病毒感染的新方法，观察微生态活菌中药发酵制剂-清温猪泰对猪免疫应答和抗蓝耳病毒（PRRSV）及猪圆环病毒（PCV-2）感染的影响，本实验在猪场后备母猪的饲料中添加0.2%清温猪泰，采用荧光定量PCR检测血液中的带毒情况，比较处理组饲喂添加清温猪泰前后以及与对照组血液中PRRSV及PCV-2带毒率的变化；比较清温猪泰饲喂前后母猪体内免疫细胞CD4、IL-10基因表达水平的变化。方法：采用荧光定量PCR检测血液中病毒相对数量和免疫细胞的CD4、IL-10基因mRNA水平的变化情况，比较清温猪泰饲喂对动物免疫机能的影响特性。 结果：后备母猪饲喂清温猪泰后，PRRSV、PCV-2感染率明显减少，PRRSV实验组收到明显的保护效果，对照组在相同环境下感染数量上升到2/5；PCV2实验组由4/5下降到1/5，而对照组反而由1/5上升大5/5。病毒含量也显著降低，以β-Actin为内参，实验组PRRSV受到保护无上升，对照组含量由0.08上升到100；实验组PCV2含量由18下降到0.7，对照组由0.88上升到48。；实验组血液免疫细胞的CD4表达水平显著升高，而实验组的IL-10水平较对照组显著降低。这显示清温猪泰加入饲料可显著增强动物的免疫水平，IL-10的下降有助于改善免疫细胞控制和清除体内的病毒，提高其抗PRRSV、PCV-2感染的能力，为实际生产中防治圆环病毒病和蓝耳病提供了新思路。 关键词：微生态；中药；益生素；发酵；活菌；清温猪泰；PRRSV；PCV-2；后备母猪；CD4；IL-10；基因表达；荧光定量PCR 前言 近年广泛流行的免疫抑制病，如猪呼吸与繁殖综合征(PRRS)和猪圆环病毒（PCV-2）引起的仔猪断奶后多系统衰竭综合征(Post-weaning multisystemie wasting syndrome，PMWS)等病，对我国养猪业造成了极严重损害，猪群生产性能下降，母猪流产增多。 特别是产房及保育仔猪大量发病及死亡，损失极为惨重。2008年及2010年下半年猪肉价格攀升，国内CPI指数不断提升，目前已被公认与猪只疫病暴发，死亡过多，供应失调密切相关。健康猪群中的高带毒率不仅影响猪的生长发育和增重，也是疫病暴发的基础。目前动物疫病肆虐，饲养和疾病防治中抗生素滥用涉及食品安全的问题更为人们深切关注。 在动物感染PRRSV和PCV2的过程中，IL-10基因和CD4基因表现出显著的改变，两种病毒对动物的免疫应答调控和关键的Th 细胞分化和生长均有抑制。Sipos等对PMWS感染猪的细胞因子mRNA及蛋白质水平进行研究发现，其外周淋巴细胞中IL-10表达水平很高，表明IL-10的过量表达可能引起免疫反应向对机体不利的方向发展。J．Nielsen等用PCV2攻毒3周龄仔猪，14～21天后出现PMWS临床症状的仔猪有明显的淋巴细胞减少征，而未出现症状的感染猪及阴性对照猪淋巴细胞无明显变化，动力学分析发现其CD3+淋巴细胞均有明显的减少；PCV2攻毒猪的T淋巴细胞亚群也有变化，CD3/C4/CD8 三联标签检测，CD3+CD4+cD8+记忆/激活细胞的含量明显下降。因此，降低IL-10基因表达水平或维持IL-10基因在低水平表达对动物抗病毒免疫应答和机体健康有重要意义。CD4基因表达水平与阳性Th免疫细胞数量的比例成正相关，对促进机体抗病毒免疫功能，提高抗病抵抗力具有推动作用。 在动物免疫应答过程中，作为非特异免疫调控的重要组成和有直接杀菌、抗病毒效果的活菌中药发酵制剂在近年来发挥出突出的效果和贡献。活菌中药发酵制剂是指选取优质中药利用活性乳酸菌进行发酵来达到提高功效的作用。 活菌中药发酵的五大革命： 1、中药成分经过益生菌转化，由大分子变成小分子，100%被机体吸收。 2、真正的疗效提速，30分钟吸收到达血液。 3、真正的药效提高，发酵中药比传统中药提高4-28倍。 4、发酵过程分解毒性，真正无毒副作用。“是药三分毒”成为历史。 5、改善中药口味，使“良药不再苦口” 在猪场饲料中添加清温猪肽展现了优异的效果，如母猪产仔率提高、死胎率下降, 特别对保育期仔猪具有明显增重效应, 临床对僵弱仔猪的生长改观；促使我们对本动物进行实验，观察其对猪体内PCV-2和PRRSV带毒率的影响。通过实验，我们找到了一种新型、经济、高效的预防和治疗猪感染PCV2和PRRSV的新途径。 1． 实验材料 1.1 清温猪肽 活菌中药发酵制剂，由哈尔滨中科生物工程有限公司提供的商品化制剂，商品名为清温猪肽。 1.2 实验猪 后备母猪对比实验：180日龄加系后备母猪10头，体重90-10