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变形杆、普罗威登及摩根菌属的鉴定1、标本要求： 1.1 尽量用药前采集标本。1.2 痰液：病人清晨咳痰于无菌、防漏小塑料盒内，切勿唾液送检。1.3 尿液：病人留取12h尿液，送检。1.4 粪便：病人留取粪便510g，送检。1.5 脑脊液及其它无菌体液：用无菌瓶直接送检。血标本不要冷冻。1.6 不可接受的标本：干的拭子、蜡盒、未消毒容器、留取24h后的尿或痰、破裂的瓶子、标本泄漏、标本无标签。2、仪器35℃孵箱、普通光学显微镜，37℃水浴箱3、试剂羊血平皿、巧克力平皿、麦康凯平皿、葡萄糖蛋白胨水、醋酸铅培养管、明胶纸片、氨基酸脱羧培养管、糖醇发酵管、VP试剂、枸橼酸培养管、湖南长沙天地人肠杆菌鉴定板。4、试验方法及原理：4.1 吲哚（靛基质）试验方法：将待检菌接种于葡萄糖蛋白胨水中，孵育过夜（一般为24－48h），加靛基质（对位二甲基苯甲醛）试剂1～2滴，观察结果。结果：两者液面接触处出现红色为阳性，无色为阴性。4.2 明胶液化试验(37℃)方法:挑取血平皿上的菌落接种于肉汤中，在其中放入明胶纸片，于37℃水浴孵24h。结果观察：如果浸泡于肉汤中的纸片变透明示结果阳性，如果没有变化示结果为阴性。4.3氨基酸脱羧试验方法：取待检菌接种于氨基酸脱羧培养管和对照管中，封石腊油，35℃培养过夜，观察结果。结果：培养管变紫色为阳性，黄色为阴性。对照管应保持黄色。注意点：（1）．培养管的pH值很重要。（2）．加封石腊油造成厌氧环境。因为在厌氧情况下氨基酸脱羧生成的胺才稳定。（3）．对照管如不呈黄色，则氨基酸脱羧酶试验不能作出判定。4.4 H2S试验方法：将待检菌穿刺接种于醋酸铅培养管中，孵育过夜，观察结果。结果：培养管变黑为阳性，不变色为阴性。4.5 枸橼酸盐试验(Simmons法)方法：将待检菌接种于枸橼酸盐培养管中，孵育过夜，观察结果。结果：有细菌生长培养管变蓝色为阳性，无颜色改变为阴性。 4.6 糖、醇发酵试验方法：接种待检菌于糖醇发酵管，35℃孵育过夜，观察。结果：培养管变红色为阳性，不变色或黄色为阴性。4.7 苯丙氨酸脱氨试验方法：将待检菌接种于苯丙氨酸脱氨培养管，35℃孵育过夜，加三氯化铁试剂，观察结果。结果：培养管变绿色为阳性，不变色为阴性。5、常规鉴定过程：5.1概述：这是一群苯丙氨酸阳性、葡萄糖酸盐阴性的细菌，属于肠道正常菌群，在环境中广泛存在，并在一定条件下引起各种感染，引起医源性感染的重要条件致病菌。5.2染色及形态：革兰阴性杆菌，两端顿圆，有明显的多形性，呈球形或丝状。有周身鞭毛，运动活泼，无荚膜、无芽孢。5.3培养特性：兼性厌氧，对营养无特殊要求，生长温度10℃－43℃。变形杆菌呈迁徙生长，此现象可以被0.1％石炭酸、4％硼酸、5％－6％琼脂以及同型血清或胆盐所抑制。肠道选择培养基上形成圆形、扁平、无色半透明、乳糖不发酵的菌落产生H2S的菌种在SS培养基上菌落中心呈黑色。5.4生化反应及鉴定要点：5.4.1 属间鉴定：变形杆菌属、普罗威登斯菌属、摩根菌属的区别可用H2S、鸟氨酸、枸椽酸盐三个试验，其鉴别见下表1表1：苯丙氨酸阳性的各属鉴别试 验变形杆菌属普罗威登斯菌属摩根菌属H2S+--鸟氨酸+/--+枸椽酸盐+/-+-5.4.2 属内鉴定：5.4.2.1 变形杆菌属种间的鉴别：见下表2表2： 变形杆菌属内种的鉴别试 验普通变形杆菌奇异变形杆菌潘尼变形杆菌靛基质+--鸟氨酸-+-麦芽糖+-+5.4.2.2 普罗威登菌属种间的鉴别：见下表3表3： 普罗威登斯菌属内种的鉴别试 验产碱普罗威登斯菌斯图普罗威登斯菌雷极普罗威登斯菌尿素--/++蕈糖-+-侧金盏花醇+-+5.4.2.3 摩根菌属的鉴定：摩根菌属常见1个种，即摩根摩根菌，其鉴定见”苯丙氨酸阳性的各属鉴别表”。6、临床意义：6.1变形杆菌属：变形杆菌属存在于肠道和医院环境中。奇异变形杆菌和普通变形杆菌引起人的原发性和继发性感染，是泌尿道感染的主要病原菌之一(仅次于大肠埃希菌)，并于泌尿道结石的形成（尿液碱化）有一定的关系。可继发于泌尿道感染引起菌血症，还常引起伤口、呼吸道等多种感染，由变形杆菌造成的新生儿脐带感染可导致高致死性菌血症和脑膜炎。奇异变形杆菌亦是婴儿肠炎的病原菌之一。偶从临床标本中分离到潘氏变形杆菌，可引起医院感染。产粘变形杆菌尚未从人类感染中分离到。6.2 普罗威登菌属：本菌属与变形杆菌一样，有碱化尿液的作用，有可能促使尿中结晶形成，与泌尿系统结石的形成有关。雷氏普罗威登菌与斯氏普罗威登菌可致泌尿道感染和其他的肠道外感染，并引起许多医院感染的爆发流行。产碱普罗威登菌可从粪便中分得，而拉氏普罗威登菌则较少从人类标本中分离到。海氏普罗威登菌可从动物标本中分离到。6.3 摩根菌可致泌尿道感染和伤口感染，并与腹泻有关。7、质量控制：本室通过参加