蜂胶提取技术和应用研究进展.doc

3.1 蜂胶的提取方法 3.1.1 乙醇冷浸法：大规模的蜂胶提取一般采用乙醇 冷浸法，将冷冻的蜂胶碾磨成细粉状，加入一定比 例的乙醇，冷浸或回流浸提。目前，所用的乙醇浓度 最好是60%～70%，冷浸法就是在常温或较低温度下 将蜂胶粉末浸入乙醇，并不定时地进行搅拌。一段 时间后，进行过滤取上清液，并用乙醇冲洗滤渣，冲 洗液一起加入到过滤液中，再进行稀释或浓缩，最 后用棕色瓶来贮存。而回流浸提法，就是用回流装 置对其进行加热，其他操作与冷浸法相类似。 程伟贤等[8]发现用70%的乙醇浸泡36h 的提取 率较高，而王启发等[9]通过试验确定最佳工艺为：乙 醇质量分数为80% , 溶剂与蜂胶的质量配比（液固 比）为8∶1, 搅拌下提取温度为40℃, 提取时间为6 h， 在此条件下, 提取液中黄酮类化合物的质量分数可 达21.5%。 此方法较简单，并且温度不高，某些易挥发和失 活的有效黄酮类不易失去，但是提取率受时间限 制，一般在两周内随时间的延长而升高。 3.1.2 水提取（AEP）：该方法与乙醇提取法基本相 同，只是溶剂变为水，也可用冷浸回流提取，提取率 同样也受浸提时间和温度的影响[10]。胡福良等[11]通 过动物实验发现，在相同剂量的情况下，蜂胶水提 液的抗炎和抗肿瘤效果与醇提液相比差异不大，甚 至优于醇提液。由于水提蜂胶易被机体吸收，副作 用小且容易调味，故极具开发潜力。 3.1.3 超声波提取法：蜂胶中的功能性成分常以乙醇 为溶剂, 采用静置或加热回流的方法进行提取。但 此法存在提取时间过长和温度过高等缺点, 从而导 致黄酮类醇溶功能性物质受到不同程度的破坏, 因 此越来越多的研究者转向开发利用新技术和新工 艺。超声波能有效破碎细胞壁或者包埋结构的外 层, 改变物质扩散, 释放内容物, 从而提高提取率。 目前, 超声波技术已在中药有效成分和功能因子提 取中被广泛应用, 呈现出良好的发展潜力。实验结 果表明，超声波提取蜂胶黄酮最佳工艺为: 乙醇浓 度79.51%, 提取时间19.31min, 提取功率538.28w, 液料比39.48∶1, 此时, 可获得最大的黄酮提取量为 5.859%[12]。 3.1.4 超临界CO2 流体提取法：将冷冻的蜂胶碾磨成 细粉状投入萃取釜中。开启超临界CO2 萃取装置， 使其以超临界流体状态在萃取缸中对蜂胶进行萃 取。萃取压力为36MPa , 萃取温度为50 ℃；分离器1 压力为6MPa , 温度35 ℃；分离器2 压力为3MPa 之 间选取, 温度为25 ℃；萃取时间为6～8 小时, 获得 粗提取物[13]。 3.1.5 乙酸乙酯法：将蜂胶用乙酸乙酯溶解成浸膏 状，静置数小时后，用质量分数为5%的NaHCO3 溶 液提取，得到蜂胶乙酸乙酯提取物（I）和蜂胶酸性物 质，再将蜂胶酸性物质用盐酸酸化，先乙醚提取（II）， 再用乙酸乙酯提取（III），最后用正丁醇提取，可 得到正丁醇提取物（IV）。其中乙酸乙酯提取物中， 蜂胶有效物浸膏的质量分数可达57.8%，正丁醇提 取物中总黄酮的质量分数可达22.5%。 3.1.6 其他方法：日本采用硼高分子电解质法提取蜂 胶。将阴离子型高分子化合物———硼的电解物的稀 释精制水溶液与含有蜂胶的纤维素充分混溶，高分 子电解物的稀释精制水溶液可不断分解蜂胶，然后 加入乙醇和以海藻为原料的纤维素，从而可提取出 含有有效成分的亲水性凝胶体，经提炼后的结晶具 有很强的除菌力，用这种方法得到的提取物具有很 好的活性。 3.2 各种提取方法的优缺点 目前采用最多的是乙醇冷浸法，但提取物在抗 菌性上有很大损失，而用超声波、超临界CO2 流体、 乙酸乙酯提取法可以较好地保存有效抗菌成分。水 提法的提取率比乙醇提取率要低，但是已证实水提 法也具有较好的抗菌性。乙醇冷浸提取工艺有利于 提取蜂胶中的黄酮类物质, 超临界CO2 流体提取工 艺有利于蜂胶中化学成分的分析。超声波提取工艺 所需时间短，且在室温下进行，都有利于那些对热不 稳定的黄酮化合物的提取。 在乙酸乙酯法的4 种提取物中，组分I 占浸膏 的质量分数为57.8%，组分II 次之，组分III 质量分 数较低，但总黄酮的质量分数组分III、IV 最高。组 分I 主要是蜂胶中的芳香挥发油、萜类化合物和部 分黄酮甙元，4 种提取物中只有组分I 香气与蜂胶 相近，具有止咳、平喘、镇痛等作用。组分I、III、IV 是 蜂胶酸化后的提取物，主要是蜂胶中黄酮类化合物 和酸类化合物。组分II 中总黄酮质量分数相对较 低，但含有香豆素和部分酸性物质，如苯甲酸、对羟 基苯甲酸等，具有抗菌、消炎、防腐作用。组分III、IV 是蜂胶中相对极性较大的提取物，其中总黄酮的质 量分数较高，主要是黄酮甙类，目前蜂胶中已发现的 黄酮类化合物有20 多种，