植物中游离氨基酸的提取_纯化与分析方法.pdf

第 28卷 第 3期 河 南 科 技 大 学 学 报 : 自 然 科 学 版 Vol. 28 No. 3 2007年 　 6月 Jou rnal of H enan U n iversity of Science and Techno logy:N atu ral Science Jun. 2007 文章编号 : 1672 - 687 1 (2007) 03 - 0076 - 04 植物中游离氨基酸的提取 、纯化及分析方法 1, 2 2 3 4 1 刘荣森 ,杨虹琦 ,黄郁维 张长水 ,孔繁伦 ( 1. 河南科技大学 林业职业学院 , 河南 洛阳 47 1002; 2. 湖南农业大学 烟草工程中心 ,湖南 长沙 4 10011; 3. 洛阳广播电 视大学 宜阳分校 ,河南 宜阳 471600; 4. 河南科技大学 化工与制药学院 , 河南 洛阳 471003) 摘要 :综述了植物游离氨基酸的提取 、纯化以及氨基酸的常用分析方法 ,包括从植物的烘干样品和鲜样品中提 取 、纯化游离氨基酸的方法 ;氨基酸的分析方法包括平面色谱法 、氨基酸 自动分析仪法 、气相色谱法 、反相高效 液相色谱法 、高效阴离子色谱 - 积分脉冲安培法 ,分析了各种氨基酸分析方法的优缺点 。 关键词 :植物 ;游离氨基酸 ;提取 ;纯化 ;分析方法 中图分类号 : Q946 文献标识码 : A 0 　前言 氨基酸是植物中的一类重要的化合物 ,是组成蛋白质的基本单位 ,在植物的氮同化 、蛋白质的合成 、 抵御病虫害等方面具有重要的作用 。分析植物中的游离氨基酸的含量对研究植物中的氮 、氨基酸 、蛋白 质的代谢及干旱 、盐分 、病菌对植物的影响以及食用 、药用价值都具有十分重要的意义 。研究游离氨基 酸含量的变化规律对植物的育种 、栽培 、施肥具有指导意义 [ 1 ] 。 1　植物中游离氨基酸的提取 1. 1　烘干材料中游离氨基酸的提取 从植物的叶片 、叶脉及种子中提取游离氨基酸一般先需要干燥处理 ,叶片 、叶脉要在 105 ～110 ℃杀 青 ,然后 60 ～80 ℃烘干 、粉碎 ,过 40 目筛 。一些研究者 [ 2 - 4 ] 用 75%或 80%的酒精作溶剂从粉碎原料中 [ 5 ] ( ) 提取氨基酸 ,也有用蒸馏水作萃取溶剂提取 ,提取的方法是常温或加热到一定温度 小于 100 ℃ 用一 定体积分数的萃取溶剂浸泡 2 ～6 h ,或加热回流 20 ～30 m in ,为了使原料中的游离氨基酸尽可能得以溶 解 ,提取过程需重复 2 ～3 次 ,然后合并提取液 、过滤 ,蒸发掉乙醇 ,既得到了氨基酸粗提液 。也有人采用 蒸馏水作溶剂超声波提取提取的方法 [ 6 ] ,或在室温下样品用 50%乙醇浸泡微波萃取 [ 7 ] ,然后离心过滤 , 若用氨基酸自动分析仪测定氨基酸的含量 ,常用 2 % ～5%的磺基水杨酸水溶液浸提 [ 8 - 9 ] 。 1. 2 　鲜叶片或鲜果肉中游离氨基酸的提取 鲜叶片或鲜果肉一般用 10% CH COOH 研磨或匀浆来进行提取 [ 10 ] ,但由于鲜叶片或鲜果肉中的蛋 3 白酶能水解蛋白质 ,造成游离氨基酸含量升高 ,故研磨要在冰浴中进行 ,新鲜材料中的脂 、蛋白质 、糖等 易被提出 ,需加入一定的试剂除去 。通常用 10%三氯乙酸 、一定浓度的醋酸铅 、磺基水杨酸或 95%乙醇 加入过夜沉淀 ,然后离心或过滤的方法除去蛋白质 ,用乙酸乙酯或乙醚萃取以除去脂类等 。 2 　游离氨基酸的纯化 从植物中提取的氨基酸粗提液中含有较多的色素 、可溶性糖 、有机酸及其他杂质 ,有必要对氨基酸 粗提液进一步进行纯化 , 以便下一步进行氨基酸含量的测定 。 最常