流式细胞的原理及临床应用.ppt

流式的原理及临床应用 杭州辉图生物有限公司 技术支持部 胡荣连 什么是流式细胞仪？ 检测流动中细胞（颗粒）的仪器 目标物可以是细胞、细菌或各种微粒0.5um~50um范围内 流式细胞仪基本原理示意图 流式细胞仪检测什么信号？ 细胞 通过流式细胞仪我们可以得到以下信息 - 相对细胞颗粒密度和内部复杂度(SSC)  - 相对细胞大小(FSC)  - 染色过细胞的相对荧光强度 流式细胞仪标本准备 染色的一般原则及方法 标本来源： 外周血、骨髓、组织块、培养细胞、脱落细胞及其他。 以及血清或各类体液样本。 抗体染色一般方法 外周血白细胞分析：100ul全血 血小板分析：1~5ul全血（根据样本血小板数量） 红细胞分析：1ul全血（根据样本中红细胞数稀释后使用） 骨髓：100ul 其他样本，计数后决定使用体积 孵育、溶血、固定 抗体孵育：室温下避光15分钟（某些情况下如：细胞内因子检测需冰育） 溶血：如样本含中有红细胞需溶血 样本溶血后离心上机检测（固定后可放置较长时间） 流式细胞仪分析报告及图谱 SS（侧向散射光）--反应细胞内物质的多少 目前流式细胞仪临床检测项目 流式细胞仪的临床应用 HIV免疫分型，CD4绝对计数 白血病和淋巴瘤的免疫分型 肿瘤的细胞周期和倍体分析 网织红细胞计数 细胞移植的交叉配型和免疫状态监测 干细胞计数 残量白血病细胞检查 HLA-B27检查 血小板功能及相关疾病 1、 HLA-B27的检测 强直性脊柱炎（ankylosing spondylistis）意为弯曲的脊柱。它是和种慢性、进行性和炎性疾病，主要累及骶骼关节、脊柱、脊柱骨软组织及四肢关节，表现为椎间盘维环和纤维环附近结缔组织的骨化，椎间动关节和四肢关节滑膜的炎症和增生，严重者可失去劳动能力。强直性脊柱炎是血清阴性脊柱关节病中具有代表性的疾病，临床上曾长期把AS 误认为是类风湿性关节炎的一个亚型，60 年代以来人们才认识到期无论从病因学、遗传学、流行病学和临床表现特点等诸多方面来看，AS 都是一种不同于类风湿性关节炎的独立疾病。就目前的研究文献而言，HLA-B27 与AS 并非绝对相关，有些AS 患者表现为HLA-B27阴性，而且并非所有HLA-B27 阳性者均出现AS 症状。 HLA-B27诊断的临床意义 强直性脊柱炎－90-100% 的强直性脊柱炎患者HLA－B27为阳性。但是HLA-B27阳性的人群中只有8－20％是强直性脊柱炎。 瑞特综合征－65－90％瑞特综合症患者HLA-B27为阳性。如果HLAB27+个体是非淋菌性尿道炎，那么有20-25%的可能性发展为瑞特综合症，只有1％的可能性正常。HLA－B27不是该疾病发生的必要条件，但是却与病程发展有紧密联系。 “反应性关节炎”－是一种自身限制的少关节型关节炎伴随着革兰氏阴性细菌如杆菌性痢疾，沙门氏菌，弧形杆菌，耶尔森氏菌和至贺氏菌引起的胃肠感染。 银屑病关节炎 - 90%的银屑病关节炎联合荐肠关节炎和脊椎炎患者HLA B27阳性。 急性前葡萄膜炎－通常表现为疼痛，畏光和流泪。可能是虹膜感染或结合了睫状体或视网膜萎缩。 青少年风湿症/慢性关节炎II－ 这些儿童中75％为HLA B27+。相反，青少年风湿症/慢性关节炎I，同样也是少关节性的，但是更常见于女孩，与慢性虹膜睫状体炎(30%)，阳性的ANA (80%)和HLA DR5关联，却不是B27。 HLA-B27的临床检测 HLA-B27属于1型MHC基因。基本上表达在机体所有有核细胞上，特别是淋巴细胞表面有丰富的含量。使用荧光定量标准微球，校正HLA-B27实验条件后，测定样本中T淋巴细胞HLA-B27表达水平。若HLA-B27表达水平大于标准微球设定MARK，则为阳性结果；若HLA-B27表达水平低于标准微球设定MARK，则为阴性结果。 Anti-HLA-B27 Kit(美国BD Biosciences公司；CAT:340183)， 其中包括：1、Anti-HLA-B27-FITC/CD3-PE 2、HLA-B27 Calibration beads 3、FACS Lysing Solution HLA-B27流式细胞仪检测 2、淋巴细胞亚群分析 淋巴细胞亚群基础知识 T淋巴细胞：主要杀伤病原体感染细胞及肿瘤细胞。 表面标志物：CD3，与TCR形成复合体，是T细胞识别抗原和转导信号的主要单位。 CD3+/CD4+：辅助性T细胞 CD3+/CD8+：杀伤性T细胞 B淋巴细胞 B淋巴细胞是免疫系统中的抗体产生细胞。 1，产生的抗体可与抗原起特异性的结合，如中和细菌的外毒素使其失去毒性