栉孔扇贝热休克蛋白70(HSP70)基因BAC-FISH定位.PDF

栉孔扇贝热休克蛋白70 （HSP70）基因的BAC-FISH 定位 1， 2 1 1 1， 3 1， 2 1 1 郇 聘 ，张晓军 ，李富花 ，张 洋 ，赵 翠 ，刘保忠 ，相建海 (1.中国科学院 海洋研究所，山东 青岛 266071；2.中国科学院 研究生院，北京 100039 ；3. Department of Soil Crop Sciences, Texas AM University, College Station, TX, USA) 摘要:利用BAC-FISH 技术，将包含HSP70 基因的BAC 克隆定位到栉孔扇贝的一对同源染色体的长臂上。 HSP70 基因的染色体定位将对深入研究该基因的结构及功能并将其应用于生产实践提供基础支持。同时， 本研究是首次对栉孔扇贝低拷贝基因进行染色体定位的实践，其结果将为栉孔扇贝的染色体的深入研究以 及染色体鉴别等工作提供必要的参考。 关键词：栉孔扇贝 （Chlamys f arreri）；热休克蛋白70 （HSP70）；荧光原位杂交；染色体 中图分类号：Q23 文献标识码：A 文章编号：1000-3096 （2009）07-00 10-06 动物在自然界中需要适应各种各样的环境胁 贝的抗逆过程中发挥作用。 迫，如温度胁迫 （高/低温胁迫）、缺氧胁迫、重金 除了编码序列的克隆和表达分析，基因的染色 属胁迫以至于病原生物入侵等。为了减少不利环境 体定位是功能基因研究的另外一个方面，对基因的 条件对有机体造成的伤害，动物体内存在一系列的 表达调控研究具有重要作用。对栉孔扇贝 HSP70 因子，在不利的环境条件下发挥作用，维持细胞结 进行定位无疑将有力地促进该基因的功能研究。目 构和功能。热休克蛋白家族 （Heat Shock Protein, 前，荧光原位杂交技术 （Fluorescence in situ HSP ）就是其中至关重要的一类蛋白。热休克现象 hybridization, FISH ）是对功能基因进行染色体定位 [1] 最早是1962 年发现的 ，它导致了一组称为热休克 最快捷有效的途径。在栉孔扇贝中，通过FISH 技 [2] 蛋白的蛋白家族的产生 。热休克蛋白除了在高温 术已经成功的定位了一些多拷贝基因，包括18S 核 胁迫中起作用外，热休克蛋白家族最受人瞩目的功 糖体 RNA 基因、组蛋白基因等[17,18] 。然而对于包 能是在细胞中行使分子伴侣的功能，包括新生肽链 括HSP70 在内的大部分功能基因，常规的FISH 技 [3,4] 的正确折叠与装配以及部分变性蛋白的挽救等 。 术难以实现定位，原因是这些序列拷贝数较低，在 在热休克蛋白家族的成员中，HSP70 家族是最保守 常规的FISH 手段下难以产生足够强的信号。对于 的一组，其命名源自于其分子质量 （68～72 ku ）。 这些低拷贝的序列，一些大片段的克隆如cosmid、 目前已经对从细菌到人在内许多物种的 HSP70 进 BAC 等，可以提供足够长的探针来产生可检测的信 [19] [20] 行了广泛的研究。研究证实，HSP70 家族成员除了 号 。近来，Zhang 等 构建了栉孔扇贝细菌人工 作为分子伴侣外，还在生物遭受环境胁迫时发挥其 染色体 （BAC ）基因组文库，使以BAC 质粒为探 它生理功能，包括对抗重金属污染，调理细胞凋亡 针的FISH 技术 （BAC-FISH ）的应用成为可能，为 [5,6] 等等 。