甜菊叶含量液相检测分析方法优化报告.doc

甜菊叶含量液相检测分析方法优化报告 液相组2014.6.8 1目的： 1）将甜菊叶样品中污染色谱柱填料的色素除去 2）将甜菊叶样品中堵塞色谱柱填料的微小粉末颗粒除去 3）减小系统峰，并除去一部分出峰杂质，优化色谱图 4）降低样品对色谱的损耗，延长色谱柱柱效和寿命 2方法 《JECFA标准（2010版）》对甜菊叶样品前处理方法进行优化，通过以下四种材料处理后进样 3材料 迪马ProElut CaRB 6ml小柱、迪马ProElut CaRB3ml小柱、过滤小柱、保护柱、0.45um过滤头。 4设备及试剂信息 系统名称/编号:HPLC1200/JY-VI0308 验证有效期：2014.7.28 分析天平型号/编号:XS105Du/JY-VI0115 验证有效期：2015.3.18色谱柱型号/编号：Welchrom C18 4.6*250mm / 乙腈（色谱纯） 批号： 生产厂家：山东禹王 磷酸二氢钠（分析纯） 批号： 生产厂家：广东光华 3.色谱条件 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相为乙腈- 1.0g/L磷酸二氢钠钠溶液（加盐酸0.5ml）（32：68）；流速为每分钟1.0ml；检测波长为210nm；柱温为30℃。 4.步骤 1）将选定的甜菊叶样品（批号：ZY2011003）粉碎，过2#筛，称取 1.0001 g样品至100ml容量瓶，加10%乙腈水适量，超声处理60min，取出放冷，加同溶剂稀释至刻度，并用滤纸过滤，取续滤液待用。 2）设计5例对比试验： 实验1：续滤液经过滤小柱后再用0.45um滤头过滤，不加保护柱，进样检测。（色谱图见附录-甜菊叶1#） 实验2：续滤液经迪马ProElut CaRB 6ml小柱后再用0.45um滤头过滤，不加保护柱，进样检测。（色谱图见附录-甜菊叶2#） 实验3：续滤液经迪马ProElut CaRB 3ml小柱后再用0.45um滤头过滤，不加保护柱，进样检测。（色谱图见附录-甜菊叶3#） 试验4：续滤液直接经0.45um滤头过滤，不加保护柱，进样检测。（色谱图见附录-甜菊叶4#） 试验5：续滤液经0.45um滤头过滤，加保护柱，进样检测。（色谱图见附录-甜菊叶5#） 3）记录上述5例试验色谱图，对比分析。 5．结果 滤纸续滤液深黄绿色，并伴有滤纸未滤掉的微小颗粒悬浮物 实验1：0.45um滤头上出现浅黄绿色残渍，挤压困难，约2个滤头才能滤出1.5ml样品，样品颜色浅黄绿色。通过色谱图计算甜菊糖含量为4.95%，实验证明：过滤小柱可以过滤掉一部分色素及不容物颗粒，但同时也会过滤掉近一半的甜菊糖苷。没有达到预期的结果。 试验2：0.45um滤头上出现少量黑点（疑迪马ProElut CaRB 3ml小柱中带出的填料），未发现黄绿色，样品颜色近乎透明无色。过滤时挤压比较困难，约3-4个滤头才能滤出1.5ml样品。色谱图中未检出甜菊糖苷，系统峰明显减小，实验证明：迪马ProElut CaRB 3ml小柱几能够完全吸附甜菊叶中的色素、不容物颗粒及样品中的其他杂质。但是同时也会吸附全部的甜菊糖苷。没有达到预期的结果。 试验3：基本同实验2. 试验4：0.45um滤头滤出浅黄绿色残渍，样品深黄绿色，过滤时挤压困难，约2个滤头才能滤出1.5ml样品。实验证明0.45um滤头过滤时只能过滤掉极少部分色素及粒径0.45um以上的不容物颗粒，猜测部分可能因过度强力挤压通过滤头。而0.45以下的均存未被过滤，这些颗粒及色素均对色谱柱柱效及寿命产生非可逆得损害。通过图谱计算测得甜菊糖苷含量10.52%，系统峰较大。 实验5：制样过程同实验4，色谱图计算甜菊糖苷含量为：10.31%与 实验4结果一致，柱压升高约20%，实验证明：加保护柱后柱压升高，含量不变，系统峰没有明显的改善。但有效的保护了分析柱。 6．结论 过本次实验验证了迪马ProElut CaRB 6ml小柱、迪马ProElut CaRB3ml小柱、过滤小柱、保护柱对甜菊叶含量测定的影响，除保护柱外均没有达到预期的结果，往后实验会继续用其他类型萃取柱或过滤柱来优化甜菊叶分析方法。 报告人： 审核：