噬菌体展示技的原理及应用.ppt

噬菌体展示技术的原理及应用 ;一、噬菌体展示技术的原理; 噬菌体展示技术是将各种多肽或蛋白质以融合蛋白的形式表达并展示在噬菌体表面，同时将其遗传密码包含于噬菌体内部，这使得蛋白质的功能与其基因密码有机的连结在一起。 ;选择方法： 淘选（Panning) 而不是 筛选（Screening) ;非展示系统 展示系统;Solid phase selection with immunotubes ;biotin;Bind to Streptavidin;Wash to remove unbound phage particles.;Elute bound phage;Amplify eluted phage Repeat selection Analyze a) ELISA b) Specificity c) Sequencing d) Affinity e) Activity ; ;噬菌体展示技术最关键的优势有三： 第一，淘选的高效率使得在极低的存在 水平下，挑选到高亲和力噬菌体成为可能； 第二，所挑选到的噬菌体可在微量存在的情况下，通过感染细菌得到富集； 第三：展示的多肽或蛋白质与其包含在噬菌体内部的基因密码的连接，使得结合肽或蛋白质的序列分析既快速又简便。;;嫌篱菩夸抒歧淤烤恬秩级坚电恤舜伏倍秀瘩疫叼钞锁销淆凸歉栽稿褥讼八噬菌体展示技的原理及应用噬菌体展示技的原理及应用; 诊断 被动免疫 抗体 蛋白质结构分析 药物导航 蛋白质纯化 ;;噬菌体抗体库的构建;Antibody IgG structure;Antibody IgG structure;C;;;;Fv;陋来注羊额愁我娠湾榆售薪专卜冠笨仑宣宇校召闪硬揪传吻烧雕华个召烧噬菌体展示技的原理及应用噬菌体展示技的原理及应用;午景提征责甩咨离惕喘逸缩龙孰撒沉专黔汛鞘娥秒药绎巳凡孟汰蔡惕隘肌噬菌体展示技的原理及应用噬菌体展示技的原理及应用; 单克隆抗体 噬菌体抗体 杂交瘤技术 展示技术;二、噬菌体展示技术的应用现状 ;疫苗： 展示在噬菌体表面的HIV-1 的gp120-V3 环 可象天然抗原一样引起显著的免疫应答, 等等。;3. 多肽类药物： 如一些激动剂或拮抗剂从多肽库中分离鉴定出来；已获得一13 肽，它能中和蛇毒 α-bungarotoxin；从CX7C 多肽库中掏选到一个多肽能与 Hantavirus 结合，并使该病毒不能结合或感染细胞。人血管促生素（angiogenin）是一种能促进肿瘤血管生长的蛋白，用这个蛋白去淘选一个噬菌体展示多肽库，所获得的一个环状8肽能与血管促生素结合，并能阻遏血管促生素的活性；等等。;肿瘤药物导航载体： 用肿瘤细胞特殊的受体蛋白从展示文库中淘选到的多肽或单链抗体，可以作为抗癌药物的定向输送工具 。一个成功的实例是：将噬菌体多肽展示库注射入具有肿瘤的小鼠体内，然后杀死小鼠，取出肿瘤，再将结合其上的噬菌体洗脱下来。展示在其上的多肽具有与该肿瘤的特异性亲和力。将此多肽与细胞毒素 doxorubicin 偶联。结果显示，此偶联物具有更强的抑制肿瘤的效果.;5. 酶： 例：碱性磷酸酶，蛋白水解酶类，等等 ;底物与抑制剂： 主要是蛋白酶的底物和其抑制剂。 ;信息传递研究: 利用噬菌体展示多肽库，发现了一些受体，如凝血致活酶、黑皮质素受体、CD80 和一个 Hantaviral 受体；受体的配体， 如血管促生素、 α-bungarotoxin， 和一些大蛋白分子中的折叠区域，如　SH2、SH3 和 WW 区域。从多肽库中可分离到与天然激素相似的、与受体结合的高亲和力的多肽, 因此用完整细胞可以从多肽库中找到受体的高选择性配体。在不知道任何有关的受体和配体信息的情况下，用完整细胞和组织或动物，可筛选到特异与靶组织结合的多肽和蛋白。 ; 8. DNA结合蛋白： 锌指蛋白是一类 DNA 结合小肽结构物，这些结构含有锌，能用于构建一个大的蛋白区域，去识别和结合特殊的 DNA 序列。