无菌操作技术微生物四项基本实验技术中的应用和意义.doc

无菌操作技术主要是指在微生物实验工作中，控制或防止各类微生物的污染及其干扰的一系列操作方法和有关措施，其中包括无菌环境设施、无菌实验器材及无菌操作方法等。 微生物学四项基本实验技术是指显微镜技术、无菌操作技术、纯种分离技术和纯种培养技术。 微生物学实验技术所用玻璃器皿。不但要像化学实验那样要求清洁，而且还要无菌（玻璃器皿、接种工具、材料要灭菌），实验过程中要严格无菌操作。实验结束后若桌面被菌液污染，可用3％来苏尔液擦拭干净，带菌工具（吸管、塑料吸嘴、玻璃刮棒、染色涂片等）洗涤前浸泡在3％来苏尔液中，消毒后再清洗。有微生物污染的废物要集中处理，不能污染环境。 无菌操作一般是在无菌环境条件下，使用无菌器材进行检验或实验过程中，防止微生物污染和干扰的一种常规操作方法。无菌操作的目的，一是保持待检物品不被环境中微生物所污染；二是防止被检微生物在操作中污染环境和感染操作人员，因而无菌操作在一定意义上讲又是安全操作。 无菌操作技术在微生物四项基本实验技术中的应用和意义从以下四个方面做简要的论述： 一、在显微镜技术中的应用和意义 微生物个体微小，必须借助显微镜才能观察到，因此在微生物学的各项实验技术中，显微镜就成为研究者不可缺少的工具。显微镜的种类很多，根据其结构，一般分为光学显微镜和非光学显微镜两大类，在实验室观察微生物形态常用的显微镜，以光学显微镜最为常见。在显微镜技术中必不可少的是涂片、染色等技术，无论是在制片还是染色等过程中，防止杂菌的污染即无菌操作都是非常重要的，一旦被观察的玻片遭到杂菌污染，将使观察结果受到严重偏差和影响。 因此在操作过程中为保证无菌操作应注意： = 1 \* GB3 ①在实验室观察平板培养物时，一般不宜开盖观察；检验结果，可以开盖检查。如取菌作涂片染色或移植培养时。培养皿上下盖可适度开缝，但不准完全揭开； = 2 \* GB3 ②涂片染色时应使用夹子夹持玻片，切勿用手直接拿玻片，以防感染细菌； = 3 \* GB3 ③用过的玻片应放置消毒液中或直接煮沸消毒，冲洗液也应煮沸或消毒处理后再倒掉以免污染环境。 二、无菌操作技术 在微生物实验中，菌种的移值、接种和分离工作等，都要排除杂菌的污染，才能获得纯的符合要求的微生物纯培养体。为此，除严格按无菌操作进行外，尚需要有一个无杂菌污染的工作环境。通常，可在酒精灯旁进行无菌接种；小规模的操作可以使用无菌箱(接种箱)或超净工作台；工作量大的使用无菌室(接种室)；要求严格的可在无菌室内再结合使用超净工作台。 无菌操作技术包括无菌环境、无菌器材和无菌操作三个方面。 无菌环境只是相对而言的，是指人们利用物理的方法或化学的方法，在某一可控制空间内使微生物数量降低至最低限度，接近于无菌的一种空间。而无菌室和无菌柜、超净工作台就可做到这样的空间。无菌室是最常用的无菌环境之一。无菌室的建筑设计应考虑布局合理，使用方便，操作安全以及造价适宜等条件。无菌柜的优点是简单轻便体积小，易于灭菌消毒，安全并可移动，但操作不便，适用于一般接种操作，尤其适用于致病菌检验中阳性菌的接种、划线等操作。超净工作台目前较常用，它是通过通入经超细过滤的无菌空气以维持其无菌状态的。 无菌器材是无菌技术的主要组成部分，微生物检验和实验用器材可分为两类： = 1 \* GB3 ①器材灭菌：凡是检验中使用的器材，能灭菌处理的必须灭菌，如玻璃器皿（包括注射器、吸管、滴管、三角瓶、试管等）、培养基、稀释剂、无菌衣、口罩、胶管、乳胶头。金属器材（如外科刀、剪、镊子、针头等），凡能包裹的，应先用包装纸包裹后，再进行灭菌。 = 2 \* GB3 ②器材消毒：凡检验用器材无法灭菌处理的，使用前必须经消毒处理，例如无菌室内的凳、试管架、天平、工作服等，这些虽然无法灭菌，但是可以消毒。消毒可用化学药品熏蒸、喷洒或擦拭。 上述的无菌环境条件只是相对而言，实际上不可能保持环境的绝对无菌。因此关键是要严格进行正确的无菌操作。 三、在纯种分离技术中的应用和意义 在微生物学中，为了研究某种微生物的特性，必须把它们从混杂的微生物群体中分离出来，从而获得某一菌株的纯培养物，这种获得只含有某一种或某一株微生物纯培养的过程，成为微生物的分离与纯化。 为了获得某种微生物的纯培养物，一般是根据该微生物的特性，设计适宜的培养基和培养条件，以利于该微生物的生长繁殖，或加入某些抑制因素，造成只利于此菌生长，而不利于其他菌生长的环境条件，从而淘汰其他杂菌。然后再通过各种稀释法，使所需的菌在固体培养基上形成单菌落。当然，从微生物群体中经分离后生长在平板上的单个菌落，并不能保证一定是纯培养，还要经过一系列的分离、纯化和鉴定，才能获得所需要的纯菌株。 常用的微生物分离纯化的方法有：稀释混合倒平板法、稀释涂布平板法、平板划线分离法、稀释摇管法、液体培养基分离法、单细胞分离