两种类型抑郁症大鼠海马及血清内脑源性神经营养因子水平的比较论文.docVIP

　　两种类型抑郁症大鼠海马及血清内脑源性神经营养因子水平的比较论文 胡荫 尹维刚 林荣 王力 【摘要】 目的 比较应用两种方法制备的抑郁症大鼠模型血清及海马内脑源性神经营养因子(BDNF)水平的改变，为抑郁症的诊断及治疗机制的研究奠定基础。方法 应用慢性温和性刺激制备外源性抑郁症大鼠模型，通过在出生第8天的幼鼠腹腔注射五羟色胺再摄取抑制剂氯米帕明制备成年内源性抑郁症大鼠模型。应用ELISA和免疫组织化学方法检测血清及海马内BDNF水平。结果 两种模型抑郁症大鼠的蔗糖摄取量与正常对照组相比均明显减少(P 0.01);与正常对照组相比，两种抑郁症大鼠血清BDNF水平明显降低(P 0.01)，而两种抑郁症大鼠血清BDNF水平则无显著差异(P 0.05);内源性及外源性抑郁症大鼠海马内BDNF阳性细胞数与正常组大鼠相比均降低(P 0.05)，但内源性抑郁症大鼠海马内BDNF阳性细胞数降低尤为明显(P 0.01)。结论 内外源性抑郁症大鼠脑内BDNF水平均较正常组大鼠明显降低，但内源性抑郁症大鼠BDNF减少尤其明显。海马内BDNF水平的降低可能是造成抑郁症患者认知和记忆功能障碍的原因之一。 【关键词】 抑郁症;脑源性神经营养因子;海马;大鼠 以往众多的学者通过研究发现脑源性神经营养因子(BDNF)对神经元的生长，分化.freelg/kg，注射至出生后21 d结束，然后正常饲养到两个半月后，内源性抑郁症大鼠制备完成，进行下一步实验。对照组给予腹腔注射同量生理盐水。 1.3 糖水消耗试验 根据文献〔6〕大鼠首先训练饮用1%蔗糖水，即在开始的24 h内用1%蔗糖水代替自来水，然后在测量日时给予1%蔗糖水100 ml饮用24 h，同时禁食，通过称饮水瓶重量测量大鼠蔗糖水的饮用量，此后每间隔1 处测定OD值，大鼠BDNF浓度与OD值呈正比，可通过绘制标准曲线求出标本中大鼠BDNF的含量。单位为ng/ml。BDNF试剂盒购自于南京斯倍恩科技有限公司。 1.5 BDNF免疫组织化学染色 将切片入0.1 mol/L PBS漂洗后，0.5%H2O2处理，漂洗3次，5%正常羊血清封闭，分别加入兔抗大鼠BDNF多克隆抗体(1∶100)、TrkB(1∶1 000)， 4℃孵育48 h，漂洗3次，入生物素化羊抗兔IgG(1∶200)室温孵育1 h，漂洗3次，入ABC复合物(1∶100)室温孵育1 h，漂洗3次，DAB液显色，漂洗3次，贴片，室温下过夜。梯度酒精脱水，二甲苯透明，封片。阴性对照切片以0.1 mol/L PBS分别代替兔抗大鼠BDNF、TrkB抗体，其他步骤完全相同。 1.6 数据收集 利用Motic B5显微镜、电脑和图像分析软件进行图像采集和处理。对照大鼠脑立体定位图谱〔7〕，各组每只大鼠选取大致相同部位的3张切片，每张切片分别在海马的CA1、CA3区和齿状回选取5个互不重叠的视野，在400倍光镜下分别测量各个视野BDNF、TrkB阳性细胞的灰度值，取其平均值作为该张切片的平均灰度值。BDNF免疫组织化学试剂盒购自于南京斯倍恩科技有限公司。 1.7 统计学处理 数据均以x±s表示，多组间总体比较方差齐者采用方差分析(ANOVA)，两两比较采用q检验，方差不齐时采用Tamhane检验。实验前后及两组间比较采用t检验。 2 结 果 2.1 各组大鼠糖水摄取量 造模成功后，正常对照组、CMS组及氯米帕明组大鼠糖水摄取量的方差分析显示有显著差异(F=36.43，P 0.01)。CMS组及CLI组大鼠糖水摄取量明显低于正常对照组(P 0.001)，而CMS组与氯米帕明组大鼠两者之间无明显差异(P 0.05)。t检验结果显示，与实验前相比CMS组大鼠糖水摄取量也明显低于实验前(t=7.71，P 0.01)。见表1。表1 各组大鼠实验前后糖水摄取量 2.2 各组大鼠血清BDNF含量 方差分析显示，正常对照组、CMS组及氯米帕明三组大鼠血清BDNF含量〔(31.6±4.2)、(20.4±2.3)、(17.3±5.8)ng/ml〕具有显著差异(F=30.01，P 0.001)。CMS组的血清BDNF水平明显低于与正常对照组(P 0.01);CLI组大鼠血清BDNF水平也明显低于正常对照组(P 0.01)，虽然CLI组大鼠血清BDNF水平低于CMS组，但二者之间差异无统计学意义(P 0.05)。 2.3 各组大鼠海马内BDNF表达 光镜下，海马内BDNF免疫阳性细胞主要集中在CA3区和齿状回，BDNF阳性反应主要存在于胞浆中，胞核不染色。与正常组相比，CMS组大鼠海马CA3区及齿状回内BDNF免疫反应阳性神经元灰度值增加(P 0.05)，氯米帕明组大鼠海马CA3区及齿状回内BDNF免疫反应阳性神经元灰度值显著增加(P 0.01)。见表2。表2