第三节 动物的克隆41758.ppt

1.定义：可连续传代的细胞。首次传代时形成。 2.分类：（根据能否一直连续培养，是否有期限） （1）连续细胞系（多为遗传物质已变、具有异倍体核型） A、具有异体致瘤性：恶性细胞系 B、具有不死性：保留接触抑制、不致癌 （2）有限细胞系（二倍体通常为有限细胞系） 1.定义 ：通过一定的选择或纯化方法，从原代培养物或细胞系中获得的具有特殊性质的细胞。即：从细胞系中选出一个具有特殊性质细胞而培育成的细胞群。 2.特点：一般具有恒定的染色体组型、同功酶类型、病毒敏感性和生化特性等 3.分类：根据传代次数是否有限： 有限细胞株 连续细胞株 4.与细胞系的关系：是具有特殊性质的细胞系。 * * * * * * 第3节 动物的克隆 一、动物细胞的培养和克隆形成 1、广义的动物组织培养(组培)包括： 2、动物组织培养技术的发展： 1885年，鸡神经板在生理盐水中培养成活。 1903年，皮肤及白细胞培养于腹水及血清中， 存活1个月，并有细胞分裂。 1907年，美国，蛙胚神经管培养在蛙淋巴液中，观察到神经纤维末端的阿米巴运动，创立了悬浮培养法。 细胞培养、组织培养和器官培养。（技术基础） 3、动物细胞培养过程 原代培养 传代培养 胚胎或幼龄动物的组织或器官 制备细胞悬液 4、原代培养、传代培养： （1）原代培养：从机体取出后立即进行的细胞、组织培养 （2）传代培养：将传代培养细胞分成若干份，接种到若干份培养基中，使其继续生长、增殖。 思考：为什么要传代呢？ 培养一定时期的细胞会因细胞密度过大而出现接触抑制和代谢消耗引起营养枯竭，不能正常生长。 5、细胞系： 海拉肿瘤细胞系 6、细胞株： 植物细胞和动物细胞培养的比较 培养目的 脱分化 培养结果 培养基特有成分 培养基性质 理论基础 动物细胞培养 植物组织培养 比较项目 获得细胞或细胞分泌蛋白 细胞的全能性 细胞株、细胞系 植物体 快速繁殖、培育无病毒植株等 葡萄糖、动物血清 蔗糖 液体培养基 固体培养基 细胞增殖 有 无 7、克隆培养法： 把一个单细胞从异质性群体中分离出来单独培养，使之繁衍成一个新的细胞群体(纯系)的技术。 提高细胞克隆形成率的措施： 无菌无毒的环境、适宜的培养基、动物血清、滋养细胞、激素刺激、CO2调节pH、生长支持底物等。 应用： 单一细胞的克隆由于基因型一致，是研究遗传规律和生理特性的重要材料。 对培养环境有较大适应范围和具有较强独立生存能力的细胞容易做细胞克隆。如无限细胞系、转化细胞系、肿瘤细胞等 二、动物的克隆繁殖 1、动物细胞全能性的表现程度： 低等动物细胞的全能性一般比较容易体现。分化、癌变其表现型改变，基因组成的完整性可以保留。 第一次卵裂后全能性还有。 只具有分化出多种组织细胞的潜能的叫多能细胞。（只能分化出一种的叫单能细胞） 2、动物难以克隆的根本原因 基因表达的调控使得细胞中合成了专一的蛋白质。 一类基因是维持生存的；另一类基因随着组织器官和发育阶段不同而选择性表达。 如：哺乳动物的成熟红细胞只有少量的线粒体，细胞核被排出。 3、细胞核移植实验和动物的克隆繁殖： 胚胎细胞核的移植成功率远高于成体细胞。 绵羊“多莉”克隆过程： 克隆羊成功的分子细胞生物学机理： 体细胞羊克隆成功证明了： 1、高度分化的细胞经过一定技术处理也可以回复到类似受精卵时期的功能。 2、在胚胎和个体发育中，细胞质具有调控细胞核发育的作用。 应用： 为遗传疾病的治疗、优良品种的培育等提供了重要途径；对濒危动物的保存等等都有重要意义。 重组移核细胞丢失了源于乳腺细胞的调节蛋白，经过三次分裂后，原乳腺细胞的调节蛋白便全部被卵细胞质中的蛋白因子替换了，因此核DNA被重新编排，细胞开始表达自己的基因。 （2008年宁夏卷）回答下列有关动物细胞培养的问题： (1)在动物细胞培养过程中，当贴壁细胞分裂生长到细胞表面 时，细胞会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的 。此时，瓶壁上形成的细胞层数是 。要使贴壁细胞从瓶壁上分离下来，需要用酶处理，可用的酶是 。 (2)随着细胞传代次数的增多，绝大部分细胞分裂停止，进而出现 的现象；但极少数细胞可以连续增殖，其中有些细胞会因遗传物质发生改变而变成 细胞，该种细胞的黏着性 ，细胞膜表面蛋白质（糖蛋白）的量 。 (3)现用某种大分子染料，对细胞进行染色时，观察到死细胞被染色，而活细胞