RNA提取的原理与方法解析.PDF

Quality |Reliable |Perfect RNA 提取的原理与方法 细胞中的 RNA 可以分为信使 RNA、转运 RNA 和核糖体 RNA 三大类 ，不同组织总 RNA 提取的实质就是将细胞裂解 ，释放出 RNA ，并通 过不同方式去除蛋白，DNA 等杂质，最终获得高纯度 RNA 产物的过程。 RNA 提取流程 1.样品处理 从各种不同来源样品（如细菌、酵母、血液、动物组织、植物组织和培养细胞） 或同一来源样品的不同组织（如植物幼嫩叶片、成熟根、 茎等）中提取高质量的 RNA ，因细胞结构及所含的成分不同，样品预处理的方式也各有差异。 样品的要求 最好使用新鲜的样品或取样后立即在低温（-20℃或-70℃）冷冻保存的样品，避免反复冻融，因为这会导致提取的RNA 降解和提取量下 降。 样品预处理方式 植物材料-液氮研磨 动物材料匀浆、液氮研磨- 细菌-溶菌酶破壁 酵母-液氮研磨、玻璃珠处理、混合酶破壁 2.细胞裂解 异硫氰酸胍/苯酚法 （TRIZOL ） 这是一种传统的 RNA 提取方法 ，适用于大部分动植物材料 ，但对于次生代谢产物较多的植物材料提取 RNA 效果较差。异硫氰酸胍能使核 蛋白复合体解离，并将 RNA 释放到溶液中，采用酸性酚-氯仿混合液抽提，低 PH 值的酚将使 RNA 进入水相，而蛋白质和 DNA 仍留在有 机相，从而可以完成 RNA 的提取工作。 该法应用非常广泛 ，适用于包括动物组织、微生物、培养细胞等在内的各类动物性材料 ，同时还适用于次生代谢物较少的植物性材料 ，如 幼苗、幼叶等。该法主要应用在动物组织和培养细胞的 RNA 提取中。 胍盐/ β-巯基乙醇法 适用于各种不同动物材料和次生代谢物少的植物材料。 在这种方法中，胍盐使细胞充分裂解， β-巯基乙醇作为蛋白的变性剂在实验全程中可以抑制 RNaseA 的活性，保护 RNA 不被降解。 我公司的“GREEN”系列总 RNA 提取试剂盒是基于这种方法开发的产品 ，分别适用于各类不同的材料。此系列产品的具体实验步骤和适用 范围在实验技术手册中有详细介绍，实验者可根据自己的需要进行选择。 *FOR RESEARCH USE ONLY. NOT FOR USE IN HUMAN THERAPEUTIC OR DIAGNOSTIC APPLICATIONS* Web: |Call: 400-993-2293 |Email: Order@ 1 Quality |Reliable |Perfect 其它方法 有些植物材料多糖多酚含量较高 ，如植物果实 ，番茄的叶子等 ，有些植物木质化程度较高 ，如根茎等组 。针对这类材料本公司推出了一 种全新的植物总 RNA 提取试剂 ，该试剂特别适合于从富含多糖、多酚、淀粉的材料中提取纯度高、完整性好的总 RNA ，有关的具体步骤 将在分论中详细介绍，实验者可根据自己的需要进行选择。 3. RNA 纯化及获得 纯化要求 RNA 样品中不应存在对酶 （如逆转录酶 ）有抑制作用的有机溶剂和过高浓度的金属离子。避免其它生物大分子如蛋白质、多糖和脂类分子 的污染。排除 DNA 分子的污染。 纯化方法及沉淀 方法一 ：有机溶剂抽提法 氯仿抽提 在使用 RNA 提取试剂进行 RNA 提取时，常使用氯仿进行抽提，以去除蔗糖、蛋白等杂质，并促进水相与有机相的分离，从而达到纯化 RNA 的方法。在本公司的提取 RNA 的产品中 ，与 TRIzol 同型试剂法及其衍生试剂盒。 （cat No:PH1420 |PhyZol™ Total RNA Extraction Reagent ） 沉淀 氯仿抽提 RNA 后 ，一般采用了异丙醇或乙醇来沉淀水相 RNA。加入 0.6 倍水相体积的异丙醇或与水相等体积的异丙醇 ，室温沉淀 20-30 分钟，高速离心，可获得 RNA 沉淀。 洗涤沉淀 加入无 RNase 的75%乙醇 ，将 RNA 沉淀振荡悬浮 ，使 RNA 沉淀中的盐离子被充分溶解。然后再离心 10-30分钟。再次沉淀 RNA。离心 后，小心倒掉上清（注意不要倒出 RNA 沉淀），随后快速离心 1-2秒，将残留在管壁上的乙醇手机到管底后，用小枪头吸净，超静台中 风干 1-2分钟（注